| 摘要 | 第10-13页 |
| ABSTRACT | 第13-17页 |
| 前言 | 第18-19页 |
| 第一篇 文献综述 | 第19-43页 |
| 第一章 鸡堆型艾美耳球虫主要抗原及DNA疫苗研究进展 | 第19-31页 |
| 1 堆型艾美耳球虫(Eimeria.acervulina)的流行状况 | 第19页 |
| 2 鸡球虫病的防治状况 | 第19-20页 |
| 3 E.acervulina主要抗原基因 | 第20-21页 |
| 3.1 虫体表面抗原基因 | 第20-21页 |
| 3.2 阶段性虫体抗原 | 第21页 |
| 4 E.acervulina DNA疫苗研究现状 | 第21-22页 |
| 5 细胞因子在DNA疫苗中的作用 | 第22-24页 |
| 5.1 干扰素-γ(IFN-γ) | 第22页 |
| 5.2 白细胞介素-2(IL-2) | 第22-23页 |
| 5.3 β-转化生长因子(TGF-β) | 第23-24页 |
| 5.4 IL-17 | 第24页 |
| 6 E.acervulina DNA疫苗研究前景 | 第24-26页 |
| 参考文献 | 第26-31页 |
| 第二章 表达文库免疫的研究进展 | 第31-43页 |
| 1 前言 | 第31-33页 |
| 1.1 核酸疫苗 | 第31页 |
| 1.2 核酸疫苗的新策略——表达文库免疫(ELI) | 第31-33页 |
| 2 表达文库免疫种类 | 第33-34页 |
| 2.1 rELI | 第33页 |
| 2.2 dELI | 第33-34页 |
| 2.3 cDELI | 第34页 |
| 3 表达文库免疫的关键因素 | 第34-37页 |
| 3.1 实验动物 | 第34-35页 |
| 3.2 高效的表达载体 | 第35页 |
| 3.3 文库的大小和容量 | 第35-36页 |
| 3.4 免疫途径、方法和剂量 | 第36页 |
| 3.5 增强剂和佐剂的作用 | 第36-37页 |
| 3.6 文库筛选 | 第37页 |
| 4 表达文库免疫存在的问题 | 第37-38页 |
| 5 ELI在疫苗研制中的应用前景 | 第38-39页 |
| 参考文献 | 第39-43页 |
| 第二篇 试验研究 | 第43-143页 |
| 第一章 堆型艾美耳球虫子孢子cDNA表达文库的构建 | 第43-57页 |
| 摘要 | 第43页 |
| 1 材料与方法 | 第43-51页 |
| 1.1 试验动物和饲料 | 第43-44页 |
| 1.2 试剂 | 第44页 |
| 1.3 仪器设备 | 第44页 |
| 1.4 E.acerlina江苏株孢子化卵囊的准备 | 第44页 |
| 1.5 收集子孢子 | 第44页 |
| 1.6 子孢子总RNA的提取 | 第44-45页 |
| 1.7 RNA的检测 | 第45页 |
| 1.8 mRNA的分离 | 第45-46页 |
| 1.9 cDNA的合成与修饰 | 第46-50页 |
| 1.10 cDNA与载体pVAX1.0连接 | 第50-51页 |
| 2 结果 | 第51-52页 |
| 2.1 总RNA的质量鉴定 | 第51页 |
| 2.2 大片段cDNA的选择 | 第51页 |
| 2.3 文库容量 | 第51页 |
| 2.4 克隆插入片段酶切鉴定 | 第51-52页 |
| 3 讨论 | 第52-54页 |
| 参考文献 | 第54-56页 |
| Abstract | 第56-57页 |
| 第二章 堆型艾美耳球虫cDNA表达文库免疫筛选 | 第57-73页 |
| 摘要 | 第57页 |
| 1 材料与方法 | 第57-60页 |
| 1.1 材料 | 第57-59页 |
| 1.2 方法 | 第59-60页 |
| 2 结果 | 第60-68页 |
| 2.1 文库筛选 | 第60-66页 |
| 2.2 筛选的阳性克隆的特性 | 第66-68页 |
| 3 讨论 | 第68-70页 |
| 参考文献 | 第70-71页 |
| ABSTRACT | 第71-73页 |
| 第三章 cSZ-JN1基因的克隆、表达和特性分析 | 第73-93页 |
| 摘要 | 第73页 |
| 1 材料与方法 | 第73-83页 |
| 1.1 材料 | 第73-76页 |
| 1.2 方法 | 第76-83页 |
| 2 结果 | 第83-89页 |
| 2.1 cSZ-JN1基因PCR扩增结果 | 第83-84页 |
| 2.2 cSZ-JN1基因pMD-18T重组质粒酶切鉴定 | 第84页 |
| 2.3 cSZ-JN1基因生物信息学分析 | 第84-85页 |
| 2.4 表达载体的构建和鉴定 | 第85-86页 |
| 2.5 pET28a(+)-cSZ-JN1重组表达质粒在E.coli中的表达 | 第86-87页 |
| 2.6 pET28a(+)-cSZ-JN1重组蛋白表达与纯化 | 第87-88页 |
| 2.7 Western blotting分析 | 第88页 |
| 2.8 cSZ-JN1蛋白在E.acervalina各阶段的表达分析 | 第88-89页 |
| 3 讨论 | 第89-90页 |
| 参考文献 | 第90-91页 |
| Abstract | 第91-93页 |
| 第四章 cSZ-JN1基因DNA疫苗的构建及体内表达检测 | 第93-101页 |
| 摘要 | 第93页 |
| 1 材料与方法 | 第93-95页 |
| 1.1 材料 | 第93-94页 |
| 1.2 方法 | 第94-95页 |
| 2 结果 | 第95-97页 |
| 2.1 DNA疫苗重组质粒pVAX1.0-cSZ-JN1的鉴定 | 第95-96页 |
| 2.2 RT-PCR检测 | 第96-97页 |
| 2.3 Western Blot检测 | 第97页 |
| 3 讨论 | 第97-99页 |
| 参考文献 | 第99-100页 |
| Abstract | 第100-101页 |
| 第五章 cSZ-JN1基因重组蛋白和DNA疫苗的免疫保护性实验 | 第101-115页 |
| 摘要 | 第101-102页 |
| 1 材料与方法 | 第102-105页 |
| 1.1 材料 | 第102页 |
| 1.2 方法 | 第102-105页 |
| 2 结果 | 第105-110页 |
| 2.1 增重变化 | 第105-106页 |
| 2.2 OPG值(克粪便球虫卵囊数) | 第106-107页 |
| 2.3 十二指肠病变记分 | 第107页 |
| 2.4 抗球虫指数(ACI) | 第107-108页 |
| 2.5 血清细胞因子水平检测 | 第108-110页 |
| 2.6 特异性IgG抗体检测 | 第110页 |
| 3 讨论 | 第110-112页 |
| 参考文献 | 第112-113页 |
| Abstract | 第113-115页 |
| 第六章 cSZ-JN2基因的克隆、表达和蛋白表达分析 | 第115-127页 |
| 摘要 | 第115页 |
| 1 材料与方法 | 第115-117页 |
| 1.1 材料 | 第115页 |
| 1.2 方法 | 第115-117页 |
| 2 结果 | 第117-124页 |
| 2.1 cSZ-JN2基因PCR扩增结果 | 第117-118页 |
| 2.2 表达载体的构建和鉴定 | 第118-119页 |
| 2.3 cSZ-JN2基因生物信息学分析 | 第119-120页 |
| 2.4 pET28a(+)-cSZ-JN2重组表达质粒在E coli中的表达 | 第120-121页 |
| 2.5 pET28a(+)-cSZ-JN2重组蛋白表达与纯化 | 第121-122页 |
| 2.6 Western blotting分析 | 第122-123页 |
| 2.7 cSZ-JN2蛋白在E.acervalina各阶段的抗原表达分布 | 第123-124页 |
| 3 讨论 | 第124-125页 |
| 参考文献 | 第125-126页 |
| Abstract | 第126-127页 |
| 第七章 cSZ-JN2基因DNA疫苗的构建及体内表达检测 | 第127-135页 |
| 摘要 | 第127页 |
| 1 材料与方法 | 第127-128页 |
| 1.1 材料 | 第127页 |
| 1.2 方法 | 第127-128页 |
| 2 结果 | 第128-130页 |
| 2.1 DNA疫苗重组质粒pVAX1.0-cSZ-JN2的鉴定 | 第128-129页 |
| 2.2 RT-PCR检测 | 第129-130页 |
| 2.3 Western Blot检测 | 第130页 |
| 3 讨论 | 第130-132页 |
| 参考文献 | 第132-133页 |
| Abstract | 第133-135页 |
| 第八章 cSZ-JN2基因重组蛋白和DNA疫苗的免疫保护性实验 | 第135-143页 |
| 摘要 | 第135页 |
| 1 材料与方法 | 第135-136页 |
| 1.1 材料 | 第135页 |
| 1.2 方法 | 第135-136页 |
| 2 结果 | 第136-140页 |
| 2.1 增重变化 | 第136页 |
| 2.2 OPG值(克粪便球虫卵囊数) | 第136-137页 |
| 2.3 十二指肠病变记分 | 第137-138页 |
| 2.4 抗球虫指数(ACI) | 第138页 |
| 2.5 血清细胞因子水平检测 | 第138-139页 |
| 2.6 特异性IgG抗体检测 | 第139-140页 |
| 3 讨论 | 第140-141页 |
| 参考文献 | 第141-142页 |
| Abstract | 第142-143页 |
| 全文总结 | 第143-145页 |
| 本论文的创新点 | 第145-147页 |
| 致谢 | 第147-149页 |
| 论文发表情况 | 第149页 |
