| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 第一章 前言 | 第9-13页 |
| 1.1 纤维素酶 | 第9页 |
| 1.2 外切葡聚糖酶 | 第9-12页 |
| 1.2.1 外切葡聚糖酶的来源 | 第10页 |
| 1.2.2 外切葡聚糖酶活力的测定 | 第10页 |
| 1.2.3 外切葡聚糖酶的分子生物学研究 | 第10-11页 |
| 1.2.4 国内外切葡聚糖酶基因克隆和表达的研究 | 第11-12页 |
| 1.3 本论文的研究目的及内容 | 第12-13页 |
| 1.3.1 研究目的 | 第12页 |
| 1.3.2 研究内容 | 第12-13页 |
| 第二章 材料与方法 | 第13-28页 |
| 2.1 实验材料 | 第13-18页 |
| 2.1.1 土样 | 第13页 |
| 2.1.2 菌种及质粒 | 第13页 |
| 2.1.3 培养基 | 第13-14页 |
| 2.1.4 主要试剂及药品 | 第14-15页 |
| 2.1.5 主要仪器设备 | 第15页 |
| 2.1.6 主要溶液的配制 | 第15-18页 |
| 2.2 实验方法 | 第18-28页 |
| 2.2.1 菌株的分离与筛选方法 | 第18页 |
| 2.2.2 外切葡聚糖酶酶活力的测定方法 | 第18-20页 |
| 2.2.3 粗酶液酶学性质的测定 | 第20页 |
| 2.2.4 菌株的鉴定 | 第20-22页 |
| 2.2.5 外切葡聚糖酶基因的克隆 | 第22-24页 |
| 2.2.6 外切葡聚糖酶基因的表达 | 第24-28页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第28-37页 |
| 3.1 菌株的分离与筛选 | 第28-29页 |
| 3.2 酶学性质的初步测定 | 第29-30页 |
| 3.2.1 粗酶的最适作用pH | 第29页 |
| 3.2.2 粗酶的最适作用温度 | 第29-30页 |
| 3.3 菌株的鉴定 | 第30-31页 |
| 3.3.1 菌株AC-4的形态特征 | 第30页 |
| 3.3.2 菌株AC-4 16S rDNA序列的分析及系统发育树的构建 | 第30-31页 |
| 3.4 外切葡聚糖酶基因的克隆 | 第31-32页 |
| 3.4.1 外切葡聚糖酶基因的PCR扩增 | 第31页 |
| 3.4.2 克隆质粒pMD19-T-cbh的构建与转化 | 第31-32页 |
| 3.4.3 菌株AC-4外切葡聚糖酶基因序列的测定及分析 | 第32页 |
| 3.5 外切葡聚糖酶基因在甲醇毕赤酵母中的表达 | 第32-37页 |
| 3.5.1 表达质粒pMETαA-Cbh的构建 | 第32-34页 |
| 3.5.2 重组表达质粒pMETαA-Cbh的线性化 | 第34页 |
| 3.5.3 重组表达质粒pMETαA-Cbh转化甲醇毕赤酵母PMAD16 | 第34-35页 |
| 3.5.4 SDS-PAGE检测外切葡聚糖酶基因的表达 | 第35页 |
| 3.5.5 重组菌株NM-Cbh外切葡聚糖酶酶活力的测定 | 第35-37页 |
| 第四章 全文总结与展望 | 第37-39页 |
| 4.1 总结 | 第37页 |
| 4.2 展望 | 第37-39页 |
| 参考文献 | 第39-41页 |
| 附录 | 第41-43页 |
| 致谢 | 第43页 |
