| 摘要 | 第2-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 引言 | 第9-11页 |
| 实验材料 | 第11-16页 |
| 1.1 受试细胞系 | 第11页 |
| 1.2 主要仪器和设备 | 第11-12页 |
| 1.3 主要材料和试剂 | 第12-13页 |
| 1.4 主要试剂和溶液的配制 | 第13-16页 |
| 实验方法 | 第16-24页 |
| 2.1 细胞培养 | 第16-17页 |
| 2.1.1 细胞换液 | 第16页 |
| 2.1.2 细胞传代 | 第16页 |
| 2.1.3 细胞冻存 | 第16页 |
| 2.1.4 细胞复苏 | 第16页 |
| 2.1.5 细胞计数 | 第16-17页 |
| 2.2 细胞免疫荧光 | 第17页 |
| 2.3 CCK-8 试剂盒检测 | 第17-18页 |
| 2.3.1 检测UA对细胞的毒性作用(细胞毒性实验)筛选UA最佳作用浓度 | 第17页 |
| 2.3.2 筛选高脂血清造模浓度和时间 | 第17-18页 |
| 2.3.3 检测熊果酸对HASMC细胞的抑制作用，筛选UA最佳给药时间 | 第18页 |
| 2.4 细胞转染技术 | 第18-19页 |
| 2.4.1 转染si-RNA | 第18-19页 |
| 2.4.2 转染GRIM-19 过表达质粒( pCMV-Grim19T2A-eGFP ) | 第19页 |
| 2.5 实时荧光定量PCR技术 | 第19-21页 |
| 2.5.1 细胞总RNA的提取 | 第19-20页 |
| 2.5.2 逆转录 | 第20-21页 |
| 2.5.3 PCR扩增 | 第21页 |
| 2.5.4 qRT-PCR结果分析 | 第21页 |
| 2.6 Western Blotting蛋白印迹技术 | 第21-23页 |
| 2.6.1 提取细胞总蛋白 | 第21-22页 |
| 2.6.2 BCA法检测蛋白浓度 | 第22页 |
| 2.6.3 配胶 | 第22页 |
| 2.6.4 上样及电泳 | 第22页 |
| 2.6.5 转膜 | 第22-23页 |
| 2.6.6 封闭抗体 | 第23页 |
| 2.6.7 ECL显影 | 第23页 |
| 2.6.8 WB结果分析 | 第23页 |
| 2.7 统计学分析 | 第23-24页 |
| 实验结果 | 第24-36页 |
| 3.1 HASMC的鉴定 | 第24-25页 |
| 3.1.1 细胞形态观察 | 第24-25页 |
| 3.1.2 细胞免疫荧光检测 | 第25页 |
| 3.2 CCK-8 试剂盒检测细胞增殖和活力 | 第25-28页 |
| 3.2.1 高脂血清造模浓度和时间的确定 | 第25-26页 |
| 3.2.2 UA最佳作用浓度的确定 | 第26-27页 |
| 3.2.3 UA最佳作用时间的确定 | 第27-28页 |
| 3.3 WB法检测GRIM-19 的表达 | 第28页 |
| 3.4 UA对GRIM-19、p-STAT3、CyclinD1表达的影响 | 第28-31页 |
| 3.4.1 UA对GRIM-19 mRNA和蛋白表达的影响 | 第28-29页 |
| 3.4.2 UA对HASMC中STAT3 mRNA和p-STAT3蛋白表达的影响 | 第29-30页 |
| 3.4.3 UA对HASMC中CyclinD1 mRNA和蛋白表达的影响 | 第30-31页 |
| 3.5 转染si-RNA GRIM-19 后GRIM-19、p-STAT3蛋白的表达情况 | 第31-34页 |
| 3.5.1 转染si-RNA GRIM-19 后GRIM-19 蛋白的表达情况 | 第31-32页 |
| 3.5.2 转染si-RNA GRIM-19 后p-STAT3蛋白的表达情况 | 第32-33页 |
| 3.5.3 加入p-STAT3抑制剂后，Cyclin-D1蛋白表达情况 | 第33-34页 |
| 3.6 过表达GRIM-19 对HASMC细胞增殖的影响 | 第34-36页 |
| 3.6.1 观察HASMC转染GRIM-19 质粒后的荧光表达 | 第34-35页 |
| 3.6.2 转染过表达GRIM-19 质粒后GRIM-19、p-STAT3、CyclinD1蛋白表达情况 | 第35-36页 |
| 讨论 | 第36-43页 |
| 结论 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-50页 |
| 综述 | 第50-72页 |
| 综述参考文献 | 第64-72页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第72-73页 |
| 附录 | 第73-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
