| 摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 缩略词表 Abbreviations | 第10-11页 |
| 1. 前言 | 第11-20页 |
| 1.1 课题的提出 | 第11-12页 |
| 1.2 前人研究进展 | 第12-19页 |
| 1.2.1 柑橘的成熟衰老与激素调控 | 第12-13页 |
| 1.2.2 NAC转录因子简介 | 第13-14页 |
| 1.2.3 蛋白质互作的研究方法 | 第14-19页 |
| 1.2.3.1 酵母双杂交的研究进展 | 第15-17页 |
| 1.2.3.2 假阳/阴性的排除方法 | 第17页 |
| 1.2.3.3 多元化系统 | 第17-18页 |
| 1.2.3.4 双分子荧光互补的研究进展 | 第18-19页 |
| 1.3 研究目的及内容 | 第19-20页 |
| 2. 材料和方法 | 第20-29页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-21页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第20页 |
| 2.1.2 菌株和载体 | 第20页 |
| 2.1.3 酶及主要试剂 | 第20-21页 |
| 2.1.4 主要仪器设备 | 第21页 |
| 2.2 实验方法 | 第21-29页 |
| 2.2.1 筛库载体构建 | 第21-22页 |
| 2.2.1.1 引物设计 | 第21页 |
| 2.2.1.2 NAC基因全长及短截片段PCR扩增 | 第21-22页 |
| 2.2.2 点对点回转验证引物设计 | 第22-24页 |
| 2.2.2.1 载体线性化及基因片段凝胶回收 | 第22-23页 |
| 2.2.2.2 目的基因片段与线性化载体的连接 | 第23页 |
| 2.2.2.3 热击法转化大肠杆菌及克隆筛选 | 第23-24页 |
| 2.2.3 Mating筛库 | 第24-25页 |
| 2.2.3.1 试剂法制备酵母感受态 | 第24页 |
| 2.2.3.2 诱饵载体自激活验证 | 第24页 |
| 2.2.3.3 诱饵载体毒性验证 | 第24-25页 |
| 2.2.3.4 毒性诱饵载体故障处理 | 第25页 |
| 2.2.3.5 Mating细胞融合 | 第25页 |
| 2.2.4 点对点回转阳性验证 | 第25-26页 |
| 2.2.5 筛库结果的生物信息学分析 | 第26页 |
| 2.2.6 BIFC验证互作的准确性 | 第26-29页 |
| 2.2.6.1 YFP载体构建 | 第26-27页 |
| 2.2.6.2 农杆菌感受态制备及热击转化 | 第27-28页 |
| 2.2.6.3 农杆菌侵染烟草 | 第28页 |
| 2.2.6.4 制片与激光共聚焦显微镜观察 | 第28-29页 |
| 3 结果与分析 | 第29-39页 |
| 3.1 NAC036基因全长及短截片段的克隆 | 第29页 |
| 3.2 筛库诱饵菌株的构建 | 第29-31页 |
| 3.2.1 双酶切和连接 | 第29-30页 |
| 3.2.2 大肠杆菌阳性菌落检测 | 第30-31页 |
| 3.2.3 酵母阳性菌落检测 | 第31页 |
| 3.3 诱饵载体自激活及毒性验证 | 第31-34页 |
| 3.3.1 自激活检测 | 第31-32页 |
| 3.3.2 毒性检测 | 第32-34页 |
| 3.4 Mating筛库 | 第34-35页 |
| 3.4.1 Mating筛库结果及阳性序列分析 | 第34-35页 |
| 3.5 点对点回转阳性验证 | 第35-37页 |
| 3.5.1 点对点诱饵载体的构建 | 第35-36页 |
| 3.5.2 回转酵母验证 | 第36-37页 |
| 3.6 BIFC载体构建 | 第37-38页 |
| 3.7 激光共聚焦荧光观察 | 第38-39页 |
| 4 讨论 | 第39-44页 |
| 4.1 影响酵母双杂交筛库结果的因素 | 第39-40页 |
| 4.1.1. 载体、基因片段与酵母菌株 | 第39-40页 |
| 4.1.2. 筛库的条件 | 第40页 |
| 4.1.3. 压力选择的强度 | 第40页 |
| 4.1.4. 对照的设置 | 第40页 |
| 4.2 双分子荧光互补实验的探讨与改进 | 第40-41页 |
| 4.3 筛选蛋白生物学功能的探讨 | 第41-42页 |
| 4.4 课题创新与展望 | 第42-44页 |
| 参考文献 | 第44-52页 |
| 附录A 本实验所用引物序列 | 第52-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |