| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 引言 | 第10-11页 |
| 1 文献综述 | 第11-30页 |
| 1.1 蛋白A | 第11-14页 |
| 1.1.1 金黄色葡萄球菌蛋白A | 第11页 |
| 1.1.2 蛋白A常见的应用领域 | 第11-14页 |
| 1.2 蛋白A的基因工程改造 | 第14-20页 |
| 1.2.1 蛋白A的抗碱性改造 | 第15-18页 |
| 1.2.2 针对改善蛋白A吸附剂酸洗脱条件的基因改造 | 第18页 |
| 1.2.3 融合蛋白AG | 第18-20页 |
| 1.3 蛋白质分离与纯化过程中的关键技术 | 第20-29页 |
| 1.3.1 细胞破碎技术 | 第21页 |
| 1.3.2 沉淀技术 | 第21-23页 |
| 1.3.3 层析技术 | 第23-29页 |
| 1.4 本论文的主要研究目的以及主要内容 | 第29-30页 |
| 2 耐碱蛋白A载体的构建与表达 | 第30-43页 |
| 2.1 引言 | 第30页 |
| 2.2 实验材料与仪器 | 第30-32页 |
| 2.2.1 材料和试剂 | 第30-31页 |
| 2.2.2 主要仪器 | 第31-32页 |
| 2.3 实验方法 | 第32-35页 |
| 2.3.1 耐碱蛋白A目的片段的合成 | 第32-33页 |
| 2.3.2 耐碱蛋白A目的片段的转化以及耐碱蛋白A的诱导表达 | 第33页 |
| 2.3.3 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第33-34页 |
| 2.3.4 两种耐碱蛋白A表达条件的优化 | 第34-35页 |
| 2.4 实验结果与讨论 | 第35-42页 |
| 2.4.1 合成的耐碱蛋白A序列结果 | 第35页 |
| 2.4.2 耐碱蛋白A的可溶性检测 | 第35-36页 |
| 2.4.3 IPTG浓度对耐碱蛋白A表达量的影响 | 第36-37页 |
| 2.4.4 IPTG加入时间对耐碱蛋白A表达量的影响 | 第37-39页 |
| 2.4.5 IPTG诱导时间对耐碱蛋白A表达量的影响 | 第39-40页 |
| 2.4.6 IPTG加入时间对菌体生长的影响 | 第40-42页 |
| 2.5 小结 | 第42-43页 |
| 3 耐碱蛋白A的分离纯化研究 | 第43-60页 |
| 3.1 引言 | 第43页 |
| 3.2 实验材料与仪器 | 第43-44页 |
| 3.2.1 材料和试剂 | 第43页 |
| 3.2.2 主要仪器 | 第43-44页 |
| 3.3 实验方法 | 第44-49页 |
| 3.3.1 体积排阻高效液相色谱测定耐碱蛋白A纯度 | 第44-45页 |
| 3.3.2 细胞破碎 | 第45页 |
| 3.3.3 热沉淀 | 第45页 |
| 3.3.4 聚乙烯亚胺沉淀 | 第45页 |
| 3.3.5 DNA的琼脂糖凝胶电泳 | 第45-46页 |
| 3.3.6 DEAE弱阴离子交换层析 | 第46页 |
| 3.3.7 耐碱蛋白A亲和介质的合成 | 第46-47页 |
| 3.3.8 耐碱蛋白A亲和介质对IgG的亲和纯化过程 | 第47-48页 |
| 3.3.9 耐碱蛋白A吸附剂对人IgG亲和常数的测定 | 第48-49页 |
| 3.4 实验结果 | 第49-59页 |
| 3.4.1 BCA法测定总蛋白标准曲线 | 第49页 |
| 3.4.2 裂解缓冲液离子强度优化 | 第49-50页 |
| 3.4.3 热沉淀条件优化 | 第50-51页 |
| 3.4.4 聚乙烯亚胺沉淀条件优化 | 第51-52页 |
| 3.4.5 DEAE弱阴离子交换层析 | 第52-53页 |
| 3.4.6 耐碱蛋白A纯度检测 | 第53-55页 |
| 3.4.7 耐碱蛋白A抗碱性检测 | 第55-56页 |
| 3.4.8 耐碱蛋白A的IgG结合能力检测 | 第56-57页 |
| 3.4.9 耐碱蛋白A吸附剂对人IgG的亲和常数 | 第57-59页 |
| 3.5 小结 | 第59-60页 |
| 4 融合蛋白AG的分离纯化研究 | 第60-75页 |
| 4.1 引言 | 第60页 |
| 4.2 实验材料与仪器 | 第60-61页 |
| 4.2.1 材料和试剂 | 第60页 |
| 4.2.2 主要仪器 | 第60-61页 |
| 4.3 实验方法 | 第61-63页 |
| 4.3.1 初分离纯化常用的技术 | 第61-62页 |
| 4.3.2 乙醇沉淀 | 第62页 |
| 4.3.3 DEAE弱阴离子交换层析 | 第62页 |
| 4.3.4 疏水作用层析 | 第62页 |
| 4.3.5 融合蛋白AG亲和介质的合成 | 第62页 |
| 4.3.6 融合蛋白AG亲和介质纯化IgG | 第62-63页 |
| 4.4 实验结果与讨论 | 第63-74页 |
| 4.4.1 CPAG重组质粒的双酶切验证 | 第63页 |
| 4.4.2 融合蛋白AG的可溶性验证 | 第63-64页 |
| 4.4.3 裂解缓冲液离子强度优化 | 第64-65页 |
| 4.4.4 热沉淀条件优化 | 第65页 |
| 4.4.5 聚乙烯亚胺沉淀条件优化 | 第65-67页 |
| 4.4.6 醇沉淀条件优化 | 第67页 |
| 4.4.7 离子交换层析 | 第67-69页 |
| 4.4.8 疏水作用层析 | 第69-71页 |
| 4.4.9 CPAG终产品的纯度检测以及回收率计算 | 第71-73页 |
| 4.4.10 CPAG的亲和能力能力检测 | 第73-74页 |
| 4.5 小结 | 第74-75页 |
| 结论 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-82页 |
| 附录A 实验室构建的耐碱蛋白A序列 | 第82-83页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第83-84页 |
| 致谢 | 第84-85页 |
