| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 目录 | 第9-13页 |
| 图序 | 第13-15页 |
| 表序 | 第15-16页 |
| 符号说明 | 第16-18页 |
| 第一章 绪论 | 第18-37页 |
| 1.1 肝脏中的天然免疫应答 | 第18-28页 |
| 1.1.1 肝脏的解剖学特征与免疫学特性 | 第18-20页 |
| 1.1.2 肝脏是天然免疫应答的优势器官 | 第20-22页 |
| 1.1.3 Kupffer细胞与肝脏疾病 | 第22-23页 |
| 1.1.4 NK细胞与肝脏疾病 | 第23-25页 |
| 1.1.5 NKT细胞与肝脏疾病 | 第25-27页 |
| 1.1.6 天然免疫对抗原的识别 | 第27-28页 |
| 1.2 酒精性肝病概述 | 第28-33页 |
| 1.2.1 酒精性肝病概述 | 第28-29页 |
| 1.2.2 酒精性肝病形成的分子机制 | 第29-32页 |
| 1.2.3 酒精性肝病与共致病因子 | 第32-33页 |
| 1.3 酒精性肝病中的天然免疫应答 | 第33-37页 |
| 1.3.1 Kupffer细胞与酒精性肝病 | 第33-35页 |
| 1.3.2 NK细胞与酒精性肝病 | 第35-36页 |
| 1.3.3 NKT细胞与酒精性肝病 | 第36-37页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第37-56页 |
| 2.1 实验动物 | 第37页 |
| 2.2 实验材料 | 第37-44页 |
| 2.2.1 动物实验相关试剂 | 第37页 |
| 2.2.2 细胞分离、分选相关试剂 | 第37-38页 |
| 2.2.3 流式细胞术及抗体染色相关试剂 | 第38-39页 |
| 2.2.4 组织学相关试剂及配制 | 第39页 |
| 2.2.5 分子生物学相关试剂及配制 | 第39-42页 |
| 2.2.6 细胞培养及转染相关试剂 | 第42页 |
| 2.2.7 纳米颗粒包裹siRNA相关试剂 | 第42页 |
| 2.2.8 其他试剂 | 第42页 |
| 2.2.9 实验器材和仪器设备 | 第42-44页 |
| 2.3 实验方法 | 第44-56页 |
| 2.3.1 chronic-binge酒精性肝损伤小鼠模型的建立 | 第44页 |
| 2.3.2 Kupffer细胞清除 | 第44-45页 |
| 2.3.3 人重组IL-1Ra(rhIL-1Ra)蛋白给药 | 第45页 |
| 2.3.4 细胞培养及转染 | 第45页 |
| 2.3.5 纳米材料包被的siRNA的小鼠体内给药 | 第45-46页 |
| 2.3.6 血清谷丙转氨酶(ALT)水平检测 | 第46页 |
| 2.3.7 小鼠血清及肝脏甘油三酯检测 | 第46页 |
| 2.3.8 组织病理切片和H&E染色 | 第46-47页 |
| 2.3.9 组织冰冻切片和油红O染色 | 第47页 |
| 2.3.10 免疫荧光染色 | 第47-48页 |
| 2.3.11 单个核细胞(MNCs)分离 | 第48页 |
| 2.3.12 肝脏非实质细胞分离与Kupffer细胞纯化 | 第48-49页 |
| 2.3.13 细胞计数 | 第49页 |
| 2.3.14 流式细胞术 | 第49-50页 |
| 2.3.15 肝脏MNCs的过继转输 | 第50页 |
| 2.3.16 FACS纯化iNKT细胞 | 第50页 |
| 2.3.17 MACS纯化iNKT细胞 | 第50页 |
| 2.3.18 肝脏iNKT细胞的过继转输 | 第50-51页 |
| 2.3.19 NK细胞清除 | 第51页 |
| 2.3.20 小鼠重组IL-10(rmIL-10)蛋白给药 | 第51页 |
| 2.3.21 普通PCR及荧光定量PCR | 第51-52页 |
| 2.3.22 pcDNA3.0-IL-1β及pcDNA3.0-IL-1RN过表达质粒的构建及对小鼠的处理 | 第52-53页 |
| 2.3.23 免疫印迹(Western Blot) | 第53-54页 |
| 2.3.24 统计学分析 | 第54-56页 |
| 第三章 IL-1β介导的肝脏NKT细胞的聚集与活化促进酒精性肝病发生 | 第56-77页 |
| 3.1 引言 | 第56-58页 |
| 3.2 实验结果 | 第58-74页 |
| 3.2.1 Chronic-binge酒精性肝损伤小鼠模型的建立 | 第58-59页 |
| 3.2.2 Chronic-binge酒精性肝损伤模型中NKT细胞向肝脏大量聚集 | 第59-60页 |
| 3.2.3 NKT细胞促进酒精性肝损伤的发生发展 | 第60页 |
| 3.2.4 NKT细胞向肝脏的聚集需要IL-1β信号 | 第60-62页 |
| 3.2.5 NKT细胞向肝脏的聚集与IL-12信号无关 | 第62-63页 |
| 3.2.6 Chronic-binge酒精饲喂不影响NKT归巢相关的多种趋化因子及其受体的表达 | 第63-64页 |
| 3.2.7 Kupffer细胞与NKT细胞向肝脏的聚集及活化息息相关 | 第64-66页 |
| 3.2.8 Kupffer细胞来源的IL-1β招募并活化肝脏NKT细胞 | 第66-67页 |
| 3.2.9 靶向性敲低Kupffer细胞中的IL-1β抑制NKT细胞向肝脏的聚集与活化 | 第67-71页 |
| 3.2.10 NLRP3缺失抑制NKT细胞向肝脏的聚集及活化 | 第71-73页 |
| 3.2.11 Kupffer细胞中NLRP3炎性小体的活化是产生IL-1β的主要途径 | 第73-74页 |
| 3.3 总结和讨论 | 第74-77页 |
| 第四章 iNKT细胞及IL-10通过抑制NK细胞功能促进酒精性肝病的发生 | 第77-92页 |
| 4.1 引言 | 第77-79页 |
| 4.2 实验结果 | 第79-90页 |
| 4.2.1 肝脏NK及NKT细胞在Chronic-binge酒精性肝损伤小鼠模型中呈负相关变化 | 第79-80页 |
| 4.2.2 Ja18 KO小鼠肝脏NK细胞的数量和功能在酒精饲喂后显著增加 | 第80-81页 |
| 4.2.3 酒精饲喂不影响Jα18 KO小鼠肝脏CD4+T及CD8+T细胞的数量和功能 | 第81-82页 |
| 4.2.4 NK细胞的清除促进Jα18 KO小鼠发生酒精性肝损伤 | 第82-83页 |
| 4.2.5 转输iNKT细胞抑制Jα18 KO小鼠肝脏NK细胞的数量和功能并促进其酒精性肝损伤的发生 | 第83-84页 |
| 4.2.6 缺失iNKT细胞的免疫系统重建减轻Rag1 KO鼠的酒精性肝损伤 | 第84-85页 |
| 4.2.7 酒精饲喂促进肝脏iNKT细胞产生大量IL-10 | 第85-88页 |
| 4.2.8 酒精通过IL-10抑制肝脏NK细胞的数量及功能 | 第88-89页 |
| 4.2.9 小鼠重组IL-10蛋白处理抑制Jαl8 KO小鼠肝脏NK细胞数量及功能 | 第89-90页 |
| 4.3 总结和讨论 | 第90-92页 |
| 参考文献 | 第92-106页 |
| 致谢 | 第106-108页 |
| 攻读博士学位期间的主要研究成果 | 第108页 |
