| 致谢 | 第4-5页 |
| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 绪论 | 第11-21页 |
| 1.1 鱼类病害及先天免疫相关基因 | 第11-16页 |
| 1.1.1 凝集素 | 第11-12页 |
| 1.1.2 溶菌酶 | 第12页 |
| 1.1.3 抗菌肽 | 第12-13页 |
| 1.1.4 补体分子 | 第13页 |
| 1.1.5 Toll样受体 | 第13-14页 |
| 1.1.6 干扰素 | 第14页 |
| 1.1.7 趋化因子 | 第14-16页 |
| 1.2 半滑舌鳎HMGB2基因和IFIT1基因 | 第16-19页 |
| 1.2.1 HMGB2基因 | 第16-18页 |
| 1.2.2 IFIT1基因 | 第18-19页 |
| 1.3 研究目的及意义 | 第19-21页 |
| 第二章 半滑舌鳎稳定内参筛选 | 第21-35页 |
| 2.1 材料和方法 | 第21-26页 |
| 2.1.1 实验用鱼 | 第21页 |
| 2.1.2 实验用菌株 | 第21页 |
| 2.1.3 病原侵染和组织收集 | 第21-22页 |
| 2.1.4 mRNA提取及cDNA合成 | 第22-23页 |
| 2.1.5 荧光定量PCR引物设计 | 第23-25页 |
| 2.1.6 PCR扩增效率 | 第25页 |
| 2.1.7 qRT-PCR | 第25页 |
| 2.1.8 数据分析 | 第25-26页 |
| 2.2 结果和讨论 | 第26-35页 |
| 2.2.1 PCR引物扩增效率 | 第26页 |
| 2.2.2 正常生理条件下候选内参基因的表达 | 第26-27页 |
| 2.2.3 E．tarda感染对候选内参基因表达的影响 | 第27-29页 |
| 2.2.4 病毒感染对候选内参基因表达的影响 | 第29-32页 |
| 2.2.5 讨论 | 第32-35页 |
| 第三章 半滑舌鳎HMGB2功能研究 | 第35-57页 |
| 3.1 材料和方法 | 第35-43页 |
| 3.1.1 实验用菌株及受态菌制备 | 第35页 |
| 3.1.2 CsHMGB2序列克隆 | 第35-36页 |
| 3.1.3 序列分析 | 第36页 |
| 3.1.4 CsHMGB2在正常组织中的表达 | 第36-37页 |
| 3.1.5 CsHMGB2在鱼体感染病原后的差异表达 | 第37页 |
| 3.1.6 CsHMGB2表达载体构建 | 第37-38页 |
| 3.1.7 CsHMGB2活性重组蛋白表达及纯化 | 第38-40页 |
| 3.1.8 半滑舌鳎外周血淋巴细胞的提取 | 第40-41页 |
| 3.1.9 细菌刺激PBL后Cs HMGB2的差异表达 | 第41页 |
| 3.1.10 重组蛋白rCsHMGB2对PBL免疫相关基因表达影响 | 第41页 |
| 3.1.11 重组蛋白rCsHMGB2和rCsHMGB2M对PBL抗细菌感染能力的影响 | 第41-42页 |
| 3.1.12 rCsHMGB2和rCsHMGB2M对鱼体影响 | 第42-43页 |
| 3.2 结果和讨论 | 第43-57页 |
| 3.2.1 CsHMGB2序列分析 | 第43-46页 |
| 3.2.2 CsHMGB2正常组织中的表达差异 | 第46-47页 |
| 3.2.3 CsHMGB2在鱼体感染病原后的差异表达 | 第47-48页 |
| 3.2.4 CsHMGB2活性蛋白表达及纯化 | 第48-49页 |
| 3.2.5 细菌感染对CsHMGB2在PBL中表达的影响 | 第49-50页 |
| 3.2.6 重组蛋白rCs HMGB2对PBL免疫相关基因表达影响 | 第50-51页 |
| 3.2.7 重组蛋白rCs HMGB2和rCsHMGB2M对PBL抗细菌感染能力的影响 | 第51-52页 |
| 3.2.8 rCsHMGB2和rCsHMGB2M对鱼体影响 | 第52-54页 |
| 3.2.9 讨论 | 第54-57页 |
| 第四章 半滑舌鳎IFIT1功能研究 | 第57-74页 |
| 4.1 材料和方法 | 第57-62页 |
| 4.1.1 CsIFIT1序列克隆 | 第57页 |
| 4.1.2 序列分析 | 第57页 |
| 4.1.3 CsIFIT1在正常组织中的表达差异 | 第57-58页 |
| 4.1.4 CsIFIT1在鱼体感染病毒后的表达变化 | 第58页 |
| 4.1.5 CsIFIT1过量表达质粒构建 | 第58-59页 |
| 4.1.6 无内毒素质粒大量提取 | 第59页 |
| 4.1.7 CsIFIT1在鱼体过量表达实验 | 第59-60页 |
| 4.1.8 过量表达CsIFIT1对半滑舌鳎抗病毒侵染能力的影响 | 第60-61页 |
| 4.1.9 鱼体水平RNA干扰Cs IFIT1实验 | 第61页 |
| 4.1.10 RNA干扰CsIFIT1对半滑舌鳎抗病毒侵染能力的影响 | 第61-62页 |
| 4.2 结果和讨论 | 第62-74页 |
| 4.2.1 CsIFIT1序列分析 | 第62-64页 |
| 4.2.2 CsIFIT1正常组织中的表达差异 | 第64-65页 |
| 4.2.3 CsIFIT1在鱼体感染病毒后的表达变化 | 第65-66页 |
| 4.2.4 过量表达CsIFIT1后组织中质粒DNA及质粒来源mRNA的检测 | 第66-67页 |
| 4.2.5 过量表达CsIFIT1后对半滑舌鳎抵抗病毒侵染能力的影响 | 第67-68页 |
| 4.2.6 RNA干扰效率检测 | 第68-69页 |
| 4.2.7 RNA干扰CsIFIT1对半滑舌鳎抗病毒侵染能力的影响 | 第69-71页 |
| 4.2.8 讨论 | 第71-74页 |
| 结论 | 第74-76页 |
| 参考文献 | 第76-90页 |
| 附录 | 第90-95页 |
| 发表论文与研究成果 | 第95页 |
