| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 引言 | 第11-25页 |
| 1 胚胎干细胞与多能性调控网络 | 第11-14页 |
| 1.1 胚胎干细胞的分离与培养 | 第11页 |
| 1.2 胚胎干细胞的多能性调控网络 | 第11-14页 |
| 2 重编程与诱导型多能性干细胞 | 第14-18页 |
| 2.1 体细胞重编程的技术革命 | 第14-16页 |
| 2.2 体细胞重编程的机理研究 | 第16-18页 |
| 2.2.1 体细胞重编程的分子事件 | 第16-17页 |
| 2.2.2 重编程后期多能性基因的激活 | 第17-18页 |
| 3 P-TEFb和转录延伸 | 第18-25页 |
| 3.1 真核细胞的转录调控 | 第18-19页 |
| 3.2 P-TEFb调控基因的转录延伸 | 第19-21页 |
| 3.3 P-TEFb活性的调控 | 第21-25页 |
| 3.3.1 HEXIM1/2和7SK snRNP对P-TEFb的负调控 | 第21-22页 |
| 3.3.2 BRD4对P-TEFb的正调控 | 第22-25页 |
| 实验材料和方法 | 第25-44页 |
| 4 课题中用到的细胞系及其来源 | 第25页 |
| 5 项目常用的仪器设备 | 第25-26页 |
| 6 项目用到的主要材料和试剂 | 第26-28页 |
| 7 实验方法 | 第28-44页 |
| 7.1 分子克隆 | 第28-30页 |
| 7.2 蛋白质免疫(Western blot) | 第30-32页 |
| 7.3 RNA提取、RT-PCR和Real-time PCR | 第32-33页 |
| 7.3.1 RNA提取 | 第32-33页 |
| 7.3.2 RNA的反转录 | 第33页 |
| 7.3.3 Real-time PCR | 第33页 |
| 7.4 基因组DNA提取 | 第33-34页 |
| 7.5 免疫共沉淀技术 | 第34-35页 |
| 7.5.1 实验方法 | 第34-35页 |
| 7.5.2 主要试剂的配方 | 第35页 |
| 7.6 小鼠体细胞重编程及iPSCs克隆鉴定 | 第35-38页 |
| 7.6.1 小鼠体细胞重编程 | 第35-37页 |
| 7.6.2 小鼠iPSCs的克隆鉴定 | 第37-38页 |
| 7.7 人尿液细胞的重编程 | 第38-40页 |
| 7.7.1 分离尿液细胞 | 第38页 |
| 7.7.2 尿液细胞的扩增 | 第38页 |
| 7.7.3 逆转录病毒的感染和uiPSCs(尿细胞诱导的iPSCs)的获得 | 第38-40页 |
| 7.8 免疫荧光实验 | 第40页 |
| 7.9 小鼠ESCs的培养和分化诱导 | 第40页 |
| 7.10 AP染色 | 第40-41页 |
| 7.11 ChIP-qPCR | 第41-44页 |
| 7.11.1 细胞固定 | 第41页 |
| 7.11.2 细胞裂解和超声 | 第41-42页 |
| 7.11.3 IP | 第42-43页 |
| 7.11.4 DNA提取 | 第43-44页 |
| 实验结果 | 第44-63页 |
| 8 P-TEFb调控重编程后期多能性基因的激活 | 第44-47页 |
| 8.1 CDK9为体细胞重编程所必需 | 第44-45页 |
| 8.2 CDK9通过在重编程后期促进多能性基因的表达促进重编程 | 第45-47页 |
| 9 BRD4在重编程后期促进重编程 | 第47-51页 |
| 9.1 BRD4在重编程后期发挥作用 | 第48-50页 |
| 9.2 过表达BRD4得到的iPSCs克隆的鉴定 | 第50-51页 |
| 10 BRD4以P-TEFb依赖的方式促进重编程 | 第51-55页 |
| 10.1 BRD4通过CTD2domain促进重编程 | 第51-52页 |
| 10.2 BRD4通过CTD与CDK9相互作用而促进重编程 | 第52-53页 |
| 10.3 BRD4-CTD促进人尿液细胞的重编程 | 第53-55页 |
| 11 BRD4调控多能性基因的转录延伸 | 第55-59页 |
| 11.1 BRD4-CTD在重编程过程中促进多能性基因的转录延伸 | 第55-57页 |
| 11.2 BRD4对维持小鼠ESCs多能性很重要 | 第57-59页 |
| 12 HEXIM1通过抑制P-TEFb抑制体细胞重编程 | 第59-63页 |
| 12.1 HEXIM1抑制体细胞重编程 | 第59-61页 |
| 12.2 HEXIM1抑制多能性基因的表达 | 第61-63页 |
| 结论 | 第63-64页 |
| 讨论 | 第64-67页 |
| 参考文献 | 第67-77页 |
| 附表 | 第77-80页 |
| 已发表论文 | 第80-81页 |
| 致谢 | 第81页 |
