摘要 | 第4-6页 |
Abstract | 第6-8页 |
英文缩略词表 | 第17-18页 |
第一章 前言 | 第18-22页 |
第二章 基于DNA四面体的级联式药物递送系统的制备及表征 | 第22-44页 |
1 仪器与试剂 | 第22-23页 |
1.1 仪器 | 第22-23页 |
1.2 试剂 | 第23页 |
2 实验内容 | 第23-31页 |
2.1 阿霉素(DOX)含量测定方法的建立 | 第23-24页 |
2.1.1 DOX最大吸收波长的确定 | 第23页 |
2.1.2 专属性 | 第23页 |
2.1.3 DOX标准曲线的建立 | 第23-24页 |
2.1.4 准确度考察 | 第24页 |
2.1.5 精密度考察 | 第24页 |
2.1.6 包封率测定方法的确立 | 第24页 |
2.2 实验所需主要溶液的配制 | 第24-25页 |
2.2.1 MgCl2(100 mM)溶液的配制 | 第24-25页 |
2.2.2 单链DNA(ssDNA)溶液配制 | 第25页 |
2.3 DNA四面体(DNA Tetrahedron/Td)的构建 | 第25-27页 |
2.3.1 DNA四面体的构建 | 第25-26页 |
2.3.2 DNA四面体的表征 | 第26-27页 |
2.3.2.1 凝胶电泳 | 第26页 |
2.3.2.2 凝胶成像 | 第26页 |
2.3.2.3 原子力显微镜(AFM)表征 | 第26-27页 |
2.4 缓冲液中MgCl_2溶液合理浓度的考察 | 第27页 |
2.5 插入阿霉素的DNA四面体(DOX@Td)的制备及条件优化 | 第27-28页 |
2.5.1 阿霉素(DOX)的插入 | 第27页 |
2.5.2 阿霉素(DOX)插入量测定 | 第27-28页 |
2.5.3 阿霉素(DOX)插入浓度的考察 | 第28页 |
2.5.4 最佳孵育时间的考察 | 第28页 |
2.5.5 DOX@Td稳定性考察 | 第28页 |
2.6 DOX@Td@Lipo的制备 | 第28-29页 |
2.6.1 空白脂质体的制备 | 第28页 |
2.6.2 脂质体阿霉素(DOX@Lipo)的制备 | 第28-29页 |
2.6.3 DNA四面体脂质体(Td@Lipo)的制备 | 第29页 |
2.6.4 DOX@Td@Lipo的制备 | 第29页 |
2.7 空白脂质体制备处方筛选 | 第29页 |
2.7.1 磷脂及胆固醇间的比例 | 第29页 |
2.7.2 超声时间 | 第29页 |
2.7.3 孵育温度 | 第29页 |
2.8 DOX@Td@Lipo制备处方筛选 | 第29-30页 |
2.8.1 孵育温度 | 第30页 |
2.8.2 孵育时间 | 第30页 |
2.8.3 DOX@Td的投料量 | 第30页 |
2.9 DOX@Td@Lipo稳定性及体外特征考察 | 第30-31页 |
2.9.1 DOX@Td@Lipo的稳定性考察 | 第30页 |
2.9.2 粒径分布 | 第30页 |
2.9.3 透射电镜(TEM) | 第30-31页 |
2.9.4 DOX@Td@Lipo体外释药行为考察 | 第31页 |
2.9.5 统计学分析 | 第31页 |
3 结果与讨论 | 第31-43页 |
3.1 阿霉素(DOX)含量测定方法 | 第31-33页 |
3.1.1 DOX最大吸收波长的确定 | 第31-32页 |
3.1.2 DOX的标准曲线 | 第32页 |
3.1.3 准确度 | 第32页 |
3.1.4 精密度 | 第32-33页 |
3.2 DNA四面体的表征 | 第33-34页 |
3.2.1 凝胶成像 | 第33页 |
3.2.2 AFM | 第33-34页 |
3.3 缓冲溶液中MgCl2的合理浓度 | 第34-35页 |
3.4 DOX@Td制备和条件优化 | 第35-37页 |
3.4.1 投入阿霉素(DOX)浓度的确定 | 第35-36页 |
3.4.2 最佳孵育时间 | 第36页 |
3.4.3 DOX@Td稳定性考察 | 第36-37页 |
3.5 空白脂质体制备处方筛选 | 第37-39页 |
3.5.1 磷脂及胆固醇间的比例 | 第37页 |
3.5.2 超声时间 | 第37-38页 |
3.5.3 孵育温度 | 第38页 |
3.5.4 空白脂质体制备的最优处方 | 第38-39页 |
3.6 DOX@Td@Lipo制备处方筛选 | 第39-40页 |
3.6.1 孵育温度 | 第39页 |
3.6.2 孵育时间 | 第39页 |
3.6.3 DOX@Td的投料量 | 第39-40页 |
3.7 DOX@Td@Lipo基本性质考察 | 第40-43页 |
3.7.1 DOX@Td@Lipo的稳定性 | 第40页 |
3.7.2 粒径分布 | 第40-41页 |
3.7.3 透射电镜(TEM) | 第41页 |
3.7.4 DOX@Td@Lipo的体外释药行为 | 第41-43页 |
4 本章小结 | 第43-44页 |
第三章 DOX@Td@Lipo的体外抗肿瘤活性考察 | 第44-60页 |
1 仪器与试剂 | 第44-46页 |
1.1 仪器 | 第44页 |
1.2 试剂 | 第44-45页 |
1.3 实验所需各溶液的配制 | 第45-46页 |
1.3.1 细胞培养用完全培养基的配制 | 第45页 |
1.3.2 PBS缓冲盐溶液的配制 | 第45页 |
1.3.34%多聚甲醛固定液的配制 | 第45页 |
1.3.4 细胞冻存液的配制 | 第45页 |
1.3.5 DAPI染液的配制 | 第45-46页 |
1.3.6 50%TCA溶液的配制 | 第46页 |
1.3.7 10mM Tris碱溶液的配制 | 第46页 |
1.3.8 1%冰乙酸溶液配制 | 第46页 |
1.3.9 0.4%SRB溶液配制 | 第46页 |
2 实验内容 | 第46-51页 |
2.1 MCF-7 和MCF-7/ADR细胞的培养 | 第46-48页 |
2.1.1 培养前准备 | 第46页 |
2.1.2 细胞的复苏 | 第46-47页 |
2.1.3 细胞的传代 | 第47页 |
2.1.4 细胞的冻存 | 第47页 |
2.1.5 细胞爬片与封片 | 第47-48页 |
2.1.6 细胞的计数 | 第48页 |
2.2 细胞抑制率考察 | 第48-49页 |
2.2.1 SRB法检测细胞抑制率 | 第48-49页 |
2.2.2 DNA四面体对MCF-7 和MCF-7/ADR细胞毒性的考察 | 第49页 |
2.2.3 空白脂质体对MCF-7 和MCF-7/ADR细胞毒性的考察 | 第49页 |
2.2.4 DOX@Td@Lipo对MCF-7 和MCF-7/ADR细胞毒性的考察 | 第49页 |
2.3 共聚焦显微镜考察MCF-7/ADR耐药细胞内分布行为 | 第49-50页 |
2.3.1 DOX在MCF-7/ADR细胞中的分布情况 | 第49-50页 |
2.3.2 FAM-Td在MCF-7/ADR细胞中的分布情况 | 第50页 |
2.3.3 DOX@Td在MCF-7/ADR细胞中的分布情况 | 第50页 |
2.4 乳腺癌细胞对DOX@Td@Lipo的摄取行为考察 | 第50-51页 |
3 结果与讨论 | 第51-59页 |
3.1 DNA四面体对MCF-7 和MCF-7/ADR细胞的毒性 | 第51页 |
3.2 空白脂质体对MCF-7 和MCF-7/ADR细胞的毒性 | 第51-52页 |
3.3 激光共聚焦考察DNA四面体在MCF-7/ADR耐药细胞中的分布结果 | 第52-54页 |
3.4 DOX@Td@Lipo对MCF-7 和MCF-7/ADR细胞的毒性 | 第54-56页 |
3.4.1 DOX@Td@Lipo对MCF-7 细胞的毒性 | 第54-55页 |
3.4.2 DOX@Td@Lipo对MCF-7/ADR细胞的毒性 | 第55-56页 |
3.5 乳腺癌细胞对DOX@Td@Lipo的摄取行为考察 | 第56-59页 |
4 本章小结 | 第59-60页 |
第四章 DOX@Td@Lipo的体内抗肿瘤活性研究 | 第60-70页 |
1 仪器与试剂 | 第60-61页 |
1.1 仪器 | 第60页 |
1.2 试剂 | 第60页 |
1.3 实验动物 | 第60-61页 |
2 实验方法 | 第61-63页 |
2.1 荷瘤裸鼠模型的建立 | 第61页 |
2.2 DOX@Td@Lipo在裸鼠体内的组织分布研究 | 第61-62页 |
2.2.1 DOX@Td@Lipo-IR783的制备 | 第61-62页 |
2.2.2 IR783@Lipo在裸鼠体内的组织分布 | 第62页 |
2.3 DOX@Td@Lipo体内抗肿瘤活性研究 | 第62-63页 |
2.3.1 实验分组及数据测定 | 第62-63页 |
2.3.2 HE染色病理切片考察 | 第63页 |
2.3.3 TUNEL凋亡考察 | 第63页 |
3 结果与讨论 | 第63-69页 |
3.1 DOX@Td@Lipo在裸鼠体内的组织分布 | 第63-65页 |
3.2 体内抗肿瘤活性 | 第65-69页 |
3.2.1 荷瘤裸鼠瘤体积和体重变化 | 第65-66页 |
3.2.2 HE染色病理切片 | 第66-68页 |
3.2.3 TUNEL凋亡 | 第68-69页 |
4 本章小结 | 第69-70页 |
第五章 全文总结 | 第70-72页 |
参考文献 | 第72-75页 |
个人简介 | 第75-76页 |
致谢 | 第76页 |