| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 缩略语表(Abbreviation) | 第11-12页 |
| 1 文献综述 | 第12-19页 |
| 1.1 乙型脑炎的流行病学 | 第12-14页 |
| 1.1.1 乙型脑炎的流行与分布 | 第12-13页 |
| 1.1.2 乙型脑炎的易感群体 | 第13页 |
| 1.1.3 乙型脑炎的传播 | 第13-14页 |
| 1.2 乙型脑炎病毒的分子生物学特性 | 第14-16页 |
| 1.2.1 乙型脑炎病毒的形态结构 | 第14页 |
| 1.2.2 乙型脑炎病毒基因组的结构和功能 | 第14-16页 |
| 1.2.3 乙型脑炎病毒毒株间的变异 | 第16页 |
| 1.3 乙型脑炎的致病机制 | 第16-17页 |
| 1.4 乙型脑炎的临床表现和病理变化 | 第17页 |
| 1.5 乙型脑炎的预防与治疗 | 第17-19页 |
| 2 研究目的与意义 | 第19-20页 |
| 3 实验材料与方法 | 第20-34页 |
| 3.1 实验材料 | 第20-23页 |
| 3.1.1 质粒、菌株、细胞系和实验动物 | 第20页 |
| 3.1.2 主要药品、试剂和仪器 | 第20-21页 |
| 3.1.3 使用的培养基和其配制方法 | 第21页 |
| 3.1.4 缓冲液（溶液）和其配制 | 第21-23页 |
| 3.2 实验方法 | 第23-34页 |
| 3.2.1 JEV NS2B蛋白单克隆抗体的制备 | 第23-31页 |
| 3.2.1.1 动物免疫 | 第23页 |
| 3.2.1.2 间接ELISA法检测小鼠的免疫效价 | 第23页 |
| 3.2.1.3 SP2/0 骨髓瘤细胞的准备 | 第23-24页 |
| 3.2.1.4 加强免疫 | 第24页 |
| 3.2.1.5 免疫脾细胞的准备 | 第24页 |
| 3.2.1.6 饲养细胞的准备 | 第24页 |
| 3.2.1.7 细胞融合 | 第24-25页 |
| 3.2.1.8 阳性杂交瘤细胞的筛选 | 第25页 |
| 3.2.1.9 阳性杂交瘤细胞的亚克隆 | 第25页 |
| 3.2.1.10 单克隆抗体的大量制备 | 第25-26页 |
| 3.2.1.11 单克隆抗体效价的测定 | 第26页 |
| 3.2.1.12 单克隆抗体的亚型鉴定 | 第26页 |
| 3.2.1.13 单克隆抗体的IFA分析 | 第26页 |
| 3.2.1.14 单克隆抗体的Western blot分析 | 第26-27页 |
| 3.2.1.15 单克隆抗体靶抗原表位区域的分析 | 第27-31页 |
| 3.2.1.15.1 构建原核表达质粒 | 第27-30页 |
| 3.2.1.15.2 突变体蛋白的诱导表达 | 第30-31页 |
| 3.2.1.15.3 间接ELISA分析单克隆抗体靶抗原表位区域 | 第31页 |
| 3.2.1.15.4 Western blot分析单克隆抗体靶抗原表位区域 | 第31页 |
| 3.2.2 JEV NS2B蛋白在P3 株与SA14142 株的表达差异 | 第31-34页 |
| 3.2.2.1 病毒增殖滴度 | 第32页 |
| 3.2.2.2 病毒复制水平 | 第32-33页 |
| 3.2.2.2.1 病毒RNA的提取 | 第32页 |
| 3.2.2.2.2 病毒复制水平的差异分析 | 第32-33页 |
| 3.2.2.3 病毒NS2B蛋白表达水平 | 第33-34页 |
| 4 结果与分析 | 第34-49页 |
| 4.1 免疫小鼠血清效价的测定 | 第34页 |
| 4.2 杂交瘤细胞株的筛选 | 第34页 |
| 4.3 单克隆抗体的大量制备 | 第34-35页 |
| 4.4 单克隆抗体效价的测定 | 第35页 |
| 4.5 单克隆抗体的亚型鉴定 | 第35-36页 |
| 4.6 单克隆抗体的IFA检测 | 第36页 |
| 4.7 单克隆抗体的Western blot分析 | 第36-37页 |
| 4.8 单克隆抗体抗原表位的初步分析 | 第37-41页 |
| 4.8.1 抗原表位的初步软件预测 | 第37-38页 |
| 4.8.2 JEV NS2B蛋白的截短表达 | 第38-41页 |
| 4.8.2.1 NS2B截短基因的PCR扩增 | 第38-39页 |
| 4.8.2.2 重组质粒pGEX-KG-NS2B-1 和pGEX-KG-NS2B-2 的PCR鉴定 | 第39页 |
| 4.8.2.3 截短蛋白GST-NS2B-1 和GST-NS2B-2 的原核表达及纯化 | 第39-40页 |
| 4.8.2.4 间接ELISA分析抗原表位 | 第40-41页 |
| 4.8.2.5 Western blot分析抗原表位 | 第41页 |
| 4.9 JEV P3 株与SA14142 株的NS2B蛋白表达差异比较 | 第41-49页 |
| 4.9.1 BHK细胞 | 第42-45页 |
| 4.9.2 SK细胞 | 第45-49页 |
| 5 讨论 | 第49-52页 |
| 5.1 单克隆抗体识别抗原表位的预测 | 第49页 |
| 5.2 JEV强弱毒株E蛋白、NS2B蛋白表达差异 | 第49-50页 |
| 5.3 从不同毒株蛋白表达差异分析可能存在免疫逃避机制 | 第50-52页 |
| 参考文献 | 第52-60页 |
| 致谢 | 第60页 |
