| 中文摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 1 引言 | 第13-25页 |
| 1.1 纤维素酶概况 | 第14-16页 |
| 1.1.1 纤维素酶组成 | 第14-15页 |
| 1.1.2 纤维素酶的酶促水解 | 第15-16页 |
| 1.2 多糖单加氧酶（PMO）简述 | 第16-20页 |
| 1.2.1 多糖单加氧酶（PMO）的研究过程 | 第16-18页 |
| 1.2.2 多糖单加氧酶（PMO）的分类机制 | 第18-19页 |
| 1.2.3 多糖单加氧酶（PMO）的结构与功能 | 第19-20页 |
| 1.2.4 多糖单加氧酶（PMO）的协同作用 | 第20页 |
| 1.3 嗜热真菌的研究现状 | 第20-21页 |
| 1.3.1 嗜热真菌研究意义 | 第20-21页 |
| 1.3.2 嗜热真菌的分子生物学应用 | 第21页 |
| 1.4 嗜热子囊菌PMO的获得及应用 | 第21-22页 |
| 1.4.1 嗜热子囊菌PMO基因的筛选与获得 | 第21页 |
| 1.4.2 嗜热子囊菌PMO酵母工程菌的构建 | 第21-22页 |
| 1.4.3 嗜热子囊菌PMO异源表达最适条件研究 | 第22页 |
| 1.4.4 嗜热子囊菌PMO酶解效率研究 | 第22页 |
| 1.4.5 嗜热真菌PMO酶制剂的应用分析 | 第22页 |
| 1.5 选题意义以及研究内容 | 第22-25页 |
| 1.5.1 研究意义 | 第22-23页 |
| 1.5.2 研究内容 | 第23-25页 |
| 2 材料与方法 | 第25-42页 |
| 2.1 材料 | 第25-30页 |
| 2.1.1 实验菌株 | 第25页 |
| 2.1.2 实验试剂盒 | 第25-26页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第26-27页 |
| 2.1.4 数据处理软件 | 第27页 |
| 2.1.5 培养基的制备 | 第27页 |
| 2.1.6 溶液的制备 | 第27-30页 |
| 2.2 嗜热子囊菌PMO片段的克隆及其序列分析 | 第30-34页 |
| 2.2.1 嗜热子囊菌DNA的提取 | 第30-31页 |
| 2.2.2 DNA样品检测 | 第31页 |
| 2.2.3 扩增PMOs基因 | 第31-33页 |
| 2.2.3.1 PCR引物设计 | 第31-32页 |
| 2.2.3.2 PCR扩增 | 第32页 |
| 2.2.3.3 PCR产物胶回收 | 第32-33页 |
| 2.2.4 克隆载体的连接转化 | 第33-34页 |
| 2.2.5 重组质粒的DNA提取 | 第34页 |
| 2.3 PMOs基因在毕赤酵母中的克隆表达及分离纯化 | 第34-39页 |
| 2.3.1 表达载体pPICZαA的构建 | 第34-35页 |
| 2.3.2 质粒的线性化及去磷酸化 | 第35页 |
| 2.3.3 酵母转化（电击法） | 第35-37页 |
| 2.3.3.1 P.pastoris GS115感受态细胞的制备 | 第35-36页 |
| 2.3.3.2 重组表达质粒pPICZαA-PMO的电击转化 | 第36-37页 |
| 2.3.4 二次筛选并鉴定酵母阳性转化子 | 第37页 |
| 2.3.5 重组表达质粒工程菌的培养以及多糖单加氧酶的诱导表达 | 第37-38页 |
| 2.3.6 重组多糖单加氧酶的分离与纯化 | 第38页 |
| 2.3.6.1 硫酸铵沉淀 | 第38页 |
| 2.3.6.2 HisTrapTM FF镍柱亲和层析 | 第38页 |
| 2.3.7 蛋白质分子量及其纯度鉴定 | 第38-39页 |
| 2.3.7.1 蛋白质浓度测定 | 第39页 |
| 2.3.7.2 蛋白质纯度测定 | 第39页 |
| 2.3.7.3 多糖单加氧酶氨基酸序列分析 | 第39页 |
| 2.4 PMOs蛋白的酶学特性研究 | 第39-40页 |
| 2.4.1 PMO的最适反应温度 | 第40页 |
| 2.4.2 PMO的最适反应pH值 | 第40页 |
| 2.4.3 PMO蛋白与纤维素酶的协同作用 | 第40页 |
| 2.5 多糖单加氧酶产物的TLC分析 | 第40-42页 |
| 2.5.1 薄层层析法（TLC）分析产物 | 第40-41页 |
| 2.5.2 基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（TOF）分析 | 第41-42页 |
| 3 结果与分析 | 第42-57页 |
| 3.1 嗜热子囊菌PMO蛋白的序列分析及片段克隆 | 第42-44页 |
| 3.1.1 嗜热子囊菌两个PMOs的序列分析 | 第42-43页 |
| 3.1.2 嗜热子囊菌PMO基因的扩增与鉴定 | 第43-44页 |
| 3.2 PMOs基因在毕赤酵母中的克隆表达及分离纯化 | 第44-51页 |
| 3.2.1 表达载体pPICZαA-PMO的构建 | 第44-45页 |
| 3.2.2 表达载体pPICZαA-PMOs的克隆 | 第45-47页 |
| 3.2.3 表达载体pPICZαA-PMOs的酵母转化以及抗性筛选 | 第47-48页 |
| 3.2.4 鉴定酵母阳性转化子 | 第48-49页 |
| 3.2.5 重组多糖单加氧酶的表达 | 第49-50页 |
| 3.2.6 重组多糖单加氧酶的纯化 | 第50页 |
| 3.2.7 重组多糖单加氧酶的分子量及纯度测定 | 第50-51页 |
| 3.3 嗜热子囊菌PMOs的性质研究 | 第51-57页 |
| 3.3.1 PMOs的TLC产物分析 | 第51-53页 |
| 3.3.2 最适反应温度 | 第53-54页 |
| 3.3.3 PMO的最适反应pH值 | 第54页 |
| 3.3.4 PMO的飞行时间质谱分析 | 第54-55页 |
| 3.3.5 PMO的协同作用分析 | 第55-57页 |
| 4 讨论 | 第57-60页 |
| 4.1 嗜热子囊菌PMO蛋白的序列分析及片段克隆 | 第57-59页 |
| 4.1.1 嗜热子囊菌两个PMOs的序列分析 | 第57页 |
| 4.1.2 嗜热子囊菌PMOs基因的表达载体构建 | 第57-58页 |
| 4.1.3 嗜热子囊菌重组PMO的异源表达 | 第58-59页 |
| 4.1.3.1 重组质粒的线性化 | 第58页 |
| 4.1.3.2 重组质粒的高效异源表达 | 第58-59页 |
| 4.2 嗜热子囊菌重组PMO的性质探究 | 第59-60页 |
| 4.2.1 嗜热子囊菌重组PMO的氧化裂解性 | 第59页 |
| 4.2.2 嗜热子囊菌重组PMO的酶促活性 | 第59-60页 |
| 5 结论 | 第60-61页 |
| 5.1 嗜热子囊菌PMO的克隆表达以及分离纯化 | 第60页 |
| 5.2 多糖单加氧酶酶解产物及协同作用分析 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
