| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-26页 |
| 1 慢性疼痛及其研究现状 | 第11-12页 |
| ·慢性疼痛 | 第11页 |
| ·慢性疼痛研究现状 | 第11-12页 |
| 2.D 型氨基酸氧化酶与慢性疼痛 | 第12-18页 |
| ·D型氨基酸氧化酶 | 第12-15页 |
| ·D型氨基酸氧化酶疼痛方面的前期研究 | 第15-18页 |
| 3.RNA干扰 | 第18-22页 |
| ·RNA干扰介绍 | 第18-20页 |
| ·基因导入方法 | 第20-22页 |
| ·病毒载体 | 第20-22页 |
| ·非病毒载体 | 第22页 |
| 4.RNA干扰用于慢性疼痛治疗的研究 | 第22-24页 |
| 5 研究内容和研究意义 | 第24-26页 |
| 第二章 材料与方法 | 第26-38页 |
| 1 实验材料 | 第26-27页 |
| ·细胞株 | 第26页 |
| ·主要药品和试剂 | 第26页 |
| ·动物 | 第26-27页 |
| ·主要实验仪器 | 第27页 |
| 2 实验方法 | 第27-38页 |
| ·siRNA和shRNA的设计与合成 | 第27-30页 |
| ·siRNA设计与合成 | 第27-28页 |
| ·shRNA设计与合成 | 第28-29页 |
| ·腺病毒载体的构建与包装 | 第29-30页 |
| ·腺病毒转染NRK-52E 细胞 | 第30页 |
| ·六孔板铺板 | 第30页 |
| ·转染 | 第30页 |
| ·PEI/siRNA 复合物的制备 | 第30-31页 |
| ·实时定量PCR和Western blot | 第31-34页 |
| ·荧光定量PCR | 第31-32页 |
| ·细胞总RNA的提取 | 第31页 |
| ·RT反应 | 第31页 |
| ·DAAO 基因 cDNA PCR 条件的确定 | 第31页 |
| ·Real-time PCR | 第31-32页 |
| ·Western blot | 第32-34页 |
| ·细胞中蛋白质的提取 | 第32页 |
| ·Western Blot | 第32-34页 |
| ·酮酸法测DAAO酶活 | 第34页 |
| ·脊髓蛛网膜下腔插管 | 第34-35页 |
| ·脊髓给药 | 第35页 |
| ·大鼠福尔马林致痛模型 | 第35-36页 |
| ·大鼠骨癌痛模型 | 第36页 |
| ·机械缩足反射阈(Mechanical withdrawal threshold, MWT)测定 | 第36-37页 |
| ·实验数据统计与分析 | 第37-38页 |
| 第三章 实验结果 | 第38-53页 |
| 1.R eal-time PCR 条件验证 | 第38-41页 |
| ·凝胶电泳检测全RNA提取效率 | 第38页 |
| ·实时荧光定量PCR产物特异性 | 第38-41页 |
| 2.A d-shDAAO对大鼠肾上皮小管细胞NRK-52E中DAAO蛋白的沉默作用 | 第41-44页 |
| ·转染效率的检测 | 第41页 |
| ·Real-time PCR检测Ad-shDAAO腺病毒转染后NRK-52E细胞中DAAO mRNA表达降低 | 第41-44页 |
| ·实时荧光定量PCR检测腺病毒转染后NRK-52E细胞DAAO mRNA表达的改变- | 第41-42页 |
| ·Western blotting检测Ad-shDAAO腺病毒转染后NRK-52E细胞中DAAO 蛋白表达降低 | 第42-44页 |
| 3 鞘内注射shRNA对大鼠福尔马林疼痛的作用 | 第44-46页 |
| 4 鞘内注射siRNA对大鼠福尔马林疼痛的作用 | 第46-48页 |
| 5 鞘内注射siRNA对大鼠骨癌疼痛的作用 | 第48-50页 |
| 6 沉默脊髓DAAO后神经胶质细胞的状态变化 | 第50-53页 |
| 第四章 讨论 | 第53-57页 |
| 第五章 总结与展望 | 第57-60页 |
| 1 总结 | 第57页 |
| 2 展望 | 第57-60页 |
| 参考文献 | 第60-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 已发表文章 | 第70-72页 |
