| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 第1章 文献综述 | 第12-22页 |
| 1.1 牛源巴氏杆菌概述 | 第12-13页 |
| 1.1.1 病原学 | 第12页 |
| 1.1.2 流行病学 | 第12页 |
| 1.1.3 临床病症 | 第12-13页 |
| 1.2 多杀性巴氏杆菌毒力因子的研究进展 | 第13-17页 |
| 1.2.1 荚膜 | 第13页 |
| 1.2.2 脂多糖 | 第13-14页 |
| 1.2.3 菌毛和粘附素 | 第14-15页 |
| 1.2.4 巴氏杆菌毒素 | 第15页 |
| 1.2.5 唾液酸代谢 | 第15-16页 |
| 1.2.6 外膜蛋白 | 第16-17页 |
| 1.3 多杀性巴氏杆菌疫苗的研究进展 | 第17-19页 |
| 1.3.1 弱毒苗 | 第17页 |
| 1.3.2 灭活苗 | 第17-18页 |
| 1.3.3 单位疫苗 | 第18页 |
| 1.3.4 重组疫苗 | 第18-19页 |
| 1.3.5 DNA疫苗 | 第19页 |
| 1.4 氏杆菌基因缺失技术的研究进展 | 第19-20页 |
| 1.5 研究的目的与意义 | 第20-22页 |
| 第2章 3株多杀性巴氏杆菌粘附相关基因体内表达差异的研究 | 第22-30页 |
| 2.1 材料 | 第22-24页 |
| 2.1.1 菌种 | 第22页 |
| 2.1.2 实验动物 | 第22页 |
| 2.1.3 引物 | 第22-23页 |
| 2.1.4 试剂 | 第23页 |
| 2.1.5 主要仪器设备 | 第23页 |
| 2.1.6 主要试剂的配制 | 第23-24页 |
| 2.2 方法 | 第24-25页 |
| 2.2.1 样品采集 | 第24页 |
| 2.2.2 总RNA的提取与纯化 | 第24-25页 |
| 2.2.3 cDNA制备 | 第25页 |
| 2.2.4 定量PCR反应条件 | 第25页 |
| 2.2.5 数据处理与统计分析 | 第25页 |
| 2.3 结果 | 第25-29页 |
| 2.4 讨论 | 第29-30页 |
| 第3章 牛源A型多杀性巴氏杆菌CQ2株fimA基因的原核表达及其功能的初步研究 | 第30-44页 |
| 3.1 材料 | 第30-31页 |
| 3.1.1 菌种 | 第30页 |
| 3.1.2 实验动物 | 第30页 |
| 3.1.3 引物 | 第30页 |
| 3.1.4 试剂 | 第30-31页 |
| 3.1.5 主要仪器 | 第31页 |
| 3.2 方法 | 第31-37页 |
| 3.2.1 fimA基因的克隆 | 第31页 |
| 3.2.2 重组质粒的构建 | 第31-33页 |
| 3.2.3 目的基因的诱导表达 | 第33-34页 |
| 3.2.4 重组蛋白的制备 | 第34页 |
| 3.2.5 抗血清的制备及动物保护试验 | 第34-35页 |
| 3.2.6 FimA蛋白功能的分析 | 第35-37页 |
| 3.3 结果 | 第37-42页 |
| 3.3.1 FimA蛋白功能结构域分析结果 | 第37页 |
| 3.3.2 基因fimA的扩增 | 第37-38页 |
| 3.3.3 重组质粒pET-30a(+)-fimA的双酶切鉴定 | 第38页 |
| 3.3.4 BL21-fimA的诱导表达 | 第38-39页 |
| 3.3.5 FimA蛋白的Western-blot分析 | 第39页 |
| 3.3.6 ELISA检测抗体水平结果 | 第39-40页 |
| 3.3.7 动物保护试验结果 | 第40页 |
| 3.3.8 FimA蛋白在PmCQ2的定位检测结果 | 第40-41页 |
| 3.3.9 FimA蛋白粘附抑制及其抗体封闭试验的检测结果 | 第41-42页 |
| 3.4 讨论 | 第42-44页 |
| 3.4.1 fimA基因的序列分析 | 第42-43页 |
| 3.4.2 FimA蛋白的生物学特性分析 | 第43-44页 |
| 第4章 牛源多杀性巴氏杆菌CQ2株fimA基因突变载体的构建 | 第44-56页 |
| 4.1 材料 | 第44-45页 |
| 4.1.1 菌株和质粒 | 第44页 |
| 4.1.2 引物 | 第44-45页 |
| 4.1.3 主要试剂 | 第45页 |
| 4.1.4 主要仪器 | 第45页 |
| 4.2 方法 | 第45-50页 |
| 4.2.1 重组质粒pWSK-△fimA的构建 | 第45-47页 |
| 4.2.2 重组质粒pBC-△fimA的构建 | 第47-48页 |
| 4.2.3 PmCQ2菌株化转感受态细胞的制备 | 第48页 |
| 4.2.4 PmCQ2菌株电转化感受态细胞的制备 | 第48-49页 |
| 4.2.5 PmCQ2菌株原生质体的制备 | 第49页 |
| 4.2.6 重组质粒的化学转化 | 第49页 |
| 4.2.7 重组质粒的电转化 | 第49-50页 |
| 4.2.8 突变株的PCR鉴定方法 | 第50页 |
| 4.3 结果 | 第50-54页 |
| 4.3.1 上下游同源臂的扩增结果 | 第50-51页 |
| 4.3.2 重组性重组质粒的鉴定结果 | 第51-52页 |
| 4.3.3 突变株的鉴定 | 第52-54页 |
| 4.4 讨论 | 第54-56页 |
| 展望 | 第56-58页 |
| 参考文献 | 第58-68页 |
| 附录 | 第68-70页 |
| 致谢 | 第70-72页 |
| 攻读硕士期间发表论文及参加课题 | 第72页 |
