| 摘要 | 第8-12页 |
| Abstract | 第12-17页 |
| 引言 | 第18-25页 |
| 参考文献 | 第21-25页 |
| 第一部分 CTSS表达水平与肝癌细胞转移潜能的关系 | 第25-48页 |
| 1. 材料与方法 | 第25-43页 |
| 1.1 材料 | 第25-35页 |
| 1.2 方法 | 第35-43页 |
| 2. 结果 | 第43-44页 |
| 2.1 RT-PCR检测CTSS基因在不同肝细胞系中的表达 | 第43-44页 |
| 2.2 不同肝癌细胞系CTSS蛋白水平表达 | 第44页 |
| 3 讨论 | 第44-46页 |
| 4 小结 | 第46页 |
| 参考文献 | 第46-48页 |
| 第二部分 慢病毒介导的shRNA-CTSS细胞株的建立 | 第48-67页 |
| 1 材料及试剂 | 第48-52页 |
| 1.1 细胞 | 第48-49页 |
| 1.2 主要试剂和试剂盒 | 第49页 |
| 1.3 主要实验仪器 | 第49-50页 |
| 1.4 主要溶液配制 | 第50-51页 |
| 1.5 所用引物 | 第51页 |
| 1.6 质粒和菌株 | 第51-52页 |
| 2 方法 | 第52-60页 |
| 2.1 培养293FT细胞 | 第52页 |
| 2.2 293FT细胞冻存、复苏 | 第52页 |
| 2.3 质粒转化 | 第52-57页 |
| 2.4 pMagic 8.1干扰质粒功能检测 | 第57-58页 |
| 2.5 pMagic 8.1慢病毒载体的包装 | 第58-59页 |
| 2.6 病毒感染MHCC97-H细胞制备稳定株 | 第59-60页 |
| 3. 结果 | 第60-63页 |
| 3.1 质粒鉴定 | 第60-61页 |
| 3.2 慢病毒包装 | 第61-62页 |
| 3.3 Western Blot检测慢病毒感染的MHCC97-H细胞中CTSS蛋白的表达情况 | 第62-63页 |
| 4. 讨论 | 第63-64页 |
| 5. 小结 | 第64页 |
| 参考文献 | 第64-67页 |
| 第三部分 shCTSS对MHCC97-H细胞株生物学行为的影响 | 第67-91页 |
| 1 材料与方法 | 第68-75页 |
| 1.1 材料 | 第68页 |
| 1.2 方法 | 第68-75页 |
| 2. 结果 | 第75-82页 |
| 3 讨论 | 第82-86页 |
| 4.小结 | 第86-87页 |
| 参考文献 | 第87-91页 |
| 第四部分 蜂毒素抑制CTSS调控相关信号通路对肝癌细胞生物学行为的影响 | 第91-111页 |
| 1 材料与方法 | 第91-96页 |
| 1.1 材料 | 第91-92页 |
| 1.2 方法 | 第92-96页 |
| 2. 结果 | 第96-104页 |
| 2.1 蜂毒素抑制稳定株细胞增殖活力 | 第96-97页 |
| 2.2 蜂毒素抑制稳定株细胞克隆形成 | 第97-98页 |
| 2.3 划痕实验和Transwell小室趋化实验观察蜂毒素对稳定株运动能力的影响 | 第98-100页 |
| 2.4 ELISA实验检测蜂毒素对VEGF分泌的影响 | 第100页 |
| 2.5 观察蜂毒素对HUVECs的影响作用 | 第100-102页 |
| 2.6 蜂毒素对不同侵袭能力肝癌细胞CTSS调控的作用 | 第102-103页 |
| 2.7 蜂毒素抑制稳定转染的MHCC97-H细胞CTSS、VEGF-A、p-VEGFR2、p-Ras、p-Raf,p-MEK1和p-ERK1/2蛋白的表达 | 第103-104页 |
| 3 讨论 | 第104-106页 |
| 4 小结 | 第106-107页 |
| 参考文献 | 第107-111页 |
| 第五部分 蜂毒素在体内调控C T S S蛋白表达和VEGF-A/VEGFR2/MEK1/ERK1/2通路抑制肝癌细胞生长和血管形成 | 第111-126页 |
| 1 材料与方法 | 第111-117页 |
| 1.1 材料 | 第111-114页 |
| 1.2 方法 | 第114-117页 |
| 2.结果 | 第117-121页 |
| 2.1 鼠模型大体观察 | 第118页 |
| 2.2 裸鼠肝移植瘤的体积和重量 | 第118-119页 |
| 2.3 CD34在裸鼠移植瘤组织中的表达情况 | 第119-120页 |
| 2.4 蜂毒素抑制原位移植人肝细胞癌转移裸鼠模型肝原位移植瘤中CTSS和VEGF-A/VEGFR2/MEK1/ERK1/2通路相关蛋白的表达 | 第120-121页 |
| 3 讨论 | 第121-123页 |
| 4 小结 | 第123-124页 |
| 参考文献 | 第124-126页 |
| 全文总结 | 第126-127页 |
| 本研究中的局限性和展望 | 第127-128页 |
| 附录 | 第128-131页 |
| 综述 | 第131-179页 |
| 参考文献 | 第154-179页 |
| 致谢 | 第179-180页 |
| 在读期间发表论文及研究成果 | 第180页 |
