| 致谢 | 第6-8页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-28页 |
| 1 稻瘟病与稻瘟病菌 | 第15-16页 |
| 1.1 稻瘟病与稻瘟菌 | 第15页 |
| 1.2 稻瘟病菌在水稻叶片的致病侵染循环 | 第15-16页 |
| 2 真核生物的转录调控 | 第16-17页 |
| 3 转录因子的结构和功能 | 第17-19页 |
| 3.1 DNA结合结构域 | 第17-18页 |
| 3.2 转录调控域 | 第18-19页 |
| 3.3 核定位信号 | 第19页 |
| 4 转录因子RFX家族的研究进展 | 第19-26页 |
| 4.1 转录因子RFX家族概况 | 第19-20页 |
| 4.2 转录因子RFX家族的功能 | 第20-21页 |
| 4.3 人类和其他哺乳动物中的RFX研究 | 第21-23页 |
| 4.4 果蝇中的RFX研究 | 第23页 |
| 4.5 线虫中的RFX研究 | 第23-24页 |
| 4.6 酵母中的RFX研究 | 第24-25页 |
| 4.7 其他真菌中RFX的研究 | 第25-26页 |
| 5 本实验研究的意义 | 第26-28页 |
| 第二章 材料与方法 | 第28-53页 |
| 1 实验材料 | 第28-31页 |
| 1.1 实验菌株 | 第28页 |
| 1.2 实验植物 | 第28页 |
| 1.3 实验质粒 | 第28页 |
| 1.4 实验所用培养基 | 第28-31页 |
| 1.4.1 CM培养基(1L) | 第28-29页 |
| 1.4.2 LB培养基(1L) | 第29页 |
| 1.4.3 DCM选择培养基(1L) | 第29-30页 |
| 1.4.4 AIM培养基(农杆菌诱导培养基)(1L) | 第30页 |
| 1.4.5 YPD培养基(1L) | 第30页 |
| 1.4.6 SOB培养基(1L) | 第30-31页 |
| 1.4.7 OMA培养基 | 第31页 |
| 1.4.8 SC-Ura | 第31页 |
| 2 实验方法 | 第31-53页 |
| 2.1 PCR | 第31-33页 |
| 2.1.1 一般验证用的PCR反应体系(25μl) | 第31-32页 |
| 2.1.2 扩增片段的PCR反应体系(50μl) | 第32页 |
| 2.1.3 基因敲除突变体的PCR验证 | 第32-33页 |
| 2.1.4 qPCR(实时荧光定量PCR) | 第33页 |
| 2.2 琼脂糖凝胶电泳 | 第33-34页 |
| 2.3 PCR产物的回收 | 第34-35页 |
| 2.4 基因组DNA的提取 | 第35-36页 |
| 2.4.1 CTAB法提取基因组DNA(小量、精确提取) | 第35-36页 |
| 2.4.2 粗提法提取基因组DNA(大量提取) | 第36页 |
| 2.5 稻瘟菌基因组RNA的提取 | 第36-37页 |
| 2.6 大肠杆菌质粒提取 | 第37-38页 |
| 2.7 酵母质粒的提取 | 第38-39页 |
| 2.8 MoRFX1目的基因的敲除和回补 | 第39-45页 |
| 2.8.1 MoRFX1目的基因的敲除 | 第39-44页 |
| 2.8.2 MoRFX1目的基因的回补 | 第44-45页 |
| 2.9 稻瘟菌菌株的表型分析 | 第45-46页 |
| 2.9.1 稻瘟菌的生长和产孢量测定 | 第45页 |
| 2.9.2 稻瘟菌孢子的萌发率和附着胞形成率测定 | 第45-46页 |
| 2.9.3 稻瘟菌附着胞的膨压检测 | 第46页 |
| 2.10 稻瘟菌菌株的致病性分析 | 第46-47页 |
| 2.10.1 稻瘟菌孢子对植物致病性的喷雾测定 | 第46页 |
| 2.10.2 稻瘟菌菌丝或孢子对离体水稻或大麦叶片的致病性分析 | 第46-47页 |
| 2.11 稻瘟菌菌株的交配实验 | 第47页 |
| 2.12 稻瘟菌中细胞核和细胞壁的观察 | 第47-48页 |
| 2.13 稻瘟菌中几丁质含量的测定 | 第48-51页 |
| 2.13.1 稻瘟菌菌丝中几丁质含量测定 | 第48-49页 |
| 2.13.2 稻瘟菌孢子中几丁质含量测定 | 第49页 |
| 2.13.3 glucosamine标准曲线的制作 | 第49-50页 |
| 2.13.4 实验所需溶剂的配制 | 第50-51页 |
| 2.14 稻瘟菌的细胞学分析 | 第51页 |
| 2.15 RNA测序和qPCR分析 | 第51-53页 |
| 第三章 稻瘟菌MoRFX1的功能分析 | 第53-83页 |
| 1 稻瘟菌中转录因子基因MoRFX1的敲除和回补 | 第53-55页 |
| 1.1 稻瘟菌中转录因子基因MoRFX1的敲除 | 第53-54页 |
| 1.2 稻瘟菌中转录因子基因MoRFX1的回补 | 第54-55页 |
| 2 MoRFX1突变体的表型分析 | 第55-72页 |
| 2.1 MoRFX1突变体的生长、产孢、萌发和附着胞形成 | 第55-57页 |
| 2.2 MoRFX1突变体孢子和菌丝的形态分析 | 第57-59页 |
| 2.3 MoRFX1突变体的致病性分析 | 第59-61页 |
| 2.4 MoRFX1突变体附着胞的穿透率和膨压分析 | 第61-64页 |
| 2.5 MoRFX1荧光融合蛋白在细胞核中的定位 | 第64-66页 |
| 2.6 MoRFX1基因在野生型菌株中的表达量 | 第66-67页 |
| 2.7 MoRFX1突变体细胞壁中几丁质含量的变化 | 第67-68页 |
| 2.8 MoRFX1突变体对CFW、CR和SDS的敏感性分析 | 第68-69页 |
| 2.9 MoRFX1突变体对DNA损伤试剂的敏感性分析 | 第69-72页 |
| 2.10 MoRFX1突变体的交配实验 | 第72页 |
| 3 MoRFX1突变体中基因的表达量分析 | 第72-79页 |
| 3.1 MoRFX1参与维持基因组完整性相关基因的调节 | 第74-76页 |
| 3.2 MoRFX1与分生孢子产生和致病性相关基因的调节有关 | 第76-77页 |
| 3.3 MoRFX1参与细胞壁相关基因的调节 | 第77-79页 |
| 4 讨论 | 第79-83页 |
| 参考文献 | 第83-93页 |
| 附表 本实验中用到的引物见下表 | 第93-95页 |
