| 第一部分: MiR-34c/CTNND1信号通路是化疗药物抑制肝癌进展的重要靶点 | 第7-48页 |
| 摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 前言 | 第9-12页 |
| 材料与方法 | 第12-26页 |
| 一、实验材料 | 第12-14页 |
| 1. 肝癌标本 | 第12页 |
| 2. 实验动物 | 第12页 |
| 3. 细胞系 | 第12页 |
| 4. 质粒载体 | 第12页 |
| 5. 工具酶及分子量标准 | 第12页 |
| 6. 试剂盒 | 第12页 |
| 7. 主要生化试剂 | 第12-13页 |
| 8. 培养基、血清及添加剂 | 第13页 |
| 9. 主要仪器和设备 | 第13页 |
| 10. 生物信息学分析软件 | 第13-14页 |
| 11. 引物序列 | 第14页 |
| 二、实验方法 | 第14-26页 |
| 1. 细胞学实验 | 第14-17页 |
| 1.1 细胞生长条件 | 第14-15页 |
| 1.2 细胞系的转染 | 第15页 |
| 1.3 细胞增殖实验 | 第15页 |
| 1.4 细胞凋亡实验 | 第15-16页 |
| 1.5 细胞周期实验 | 第16页 |
| 1.6 细胞划痕实验 | 第16页 |
| 1.7 细胞侵袭实验 | 第16-17页 |
| 2. 组织学实验 | 第17-19页 |
| 2.1 H&E染色 | 第17-18页 |
| 2.2 免疫组化 | 第18页 |
| 2.3 免疫荧光 | 第18-19页 |
| 3. RNA提取、逆转录及Real-time PCR | 第19-20页 |
| 3.1 Trizol法提取细胞总RNA | 第19页 |
| 3.2 RNA质量的检测 | 第19页 |
| 3.3 逆转录合成cDNA第一链 | 第19-20页 |
| 3.4 Real-time PCR实验 | 第20页 |
| 4. Western blot | 第20-22页 |
| 4.1 蛋白的提取及定量 | 第20-21页 |
| 4.2 蛋白的SDS-PAGE电泳 | 第21页 |
| 4.3 转膜 | 第21页 |
| 4.4 杂交 | 第21页 |
| 4.5 二次免疫印迹 | 第21-22页 |
| 5. 裸鼠皮下成瘤实验 | 第22页 |
| 5.1 MiR-34s对裸鼠HCC细胞皮下成瘤的影响 | 第22页 |
| 5.2 化疗药物与miR-34联合应用对裸鼠HCC细胞皮下成瘤的影响 | 第22页 |
| 6. NOD/SCID小鼠尾静脉转移实验 | 第22-23页 |
| 7. 质粒DNA的提取 | 第23-24页 |
| 7.1 质粒DNA的小量提取和定量 | 第23-24页 |
| 7.2 质粒DNA的大量制备及纯化 | 第24页 |
| 8. 靶基因3'UTR荧光报告载体的构建 | 第24-25页 |
| 9. 双荧光素酶报告基因实验 | 第25-26页 |
| 结果 | 第26-43页 |
| 1. 氟尿嘧啶和吡柔比星可以激活肝癌细胞中miR-34s的表达 | 第26-28页 |
| 2. miR-34s抑制肝癌细胞的生长 | 第28-31页 |
| 2.1 Real-time PCR检测miR-34s是否过表达 | 第28页 |
| 2.2 过表达miR-34s对肝癌细胞增殖、凋亡及周期的影响 | 第28-29页 |
| 2.3 过表达miR-34s对肝癌细胞裸鼠皮下成瘤的影响 | 第29-31页 |
| 3. miR-34s抑制肝癌细胞的侵袭转移 | 第31-34页 |
| 3.1 过表达miR-34s抑制肝癌细胞的迁移和侵袭 | 第31-33页 |
| 3.2 过表达miR-34a/c抑制肝癌细胞向NOD/SCID小鼠肺脏的转 | 第33-34页 |
| 4. CTNND1是miR-34a, b, c的共同靶基因 | 第34-36页 |
| 5. miR-34s通过靶向CTNND1抑制肝癌细胞的增殖及侵袭转移 | 第36-39页 |
| 5.1 靶基因CTNND1在肝癌细胞中的功能 | 第36-38页 |
| 5.2 CTNND1在miR-34s抑癌过程中的作用 | 第38-39页 |
| 6. 化疗药物通过miR-34c介导其对肝癌细胞增殖及侵袭转移的抑制 | 第39-41页 |
| 7. 化疗药物与miR-34协同抑制裸鼠皮下肝癌移植瘤的生长 | 第41-43页 |
| 讨论 | 第43-45页 |
| 参考文献 | 第45-48页 |
| 第二部分: RNA结合蛋白DCAF13在肝癌中的异常表达及其临床意义 | 第48-69页 |
| 摘要 | 第48-49页 |
| Abstract | 第49-50页 |
| 前言 | 第50-51页 |
| 材料和方法 | 第51-56页 |
| 一、实验材料 | 第51-52页 |
| 1. 生化试剂和试剂盒 | 第51页 |
| 2. 培养基、血清及添加剂 | 第51页 |
| 3. 细胞系 | 第51页 |
| 4. 肝癌标本 | 第51页 |
| 5. 公共数据库 | 第51页 |
| 6. 引物序列 | 第51页 |
| 7. 生物信息学分析工具 | 第51-52页 |
| 二、实验方法 | 第52-56页 |
| 1. RNA提取、逆转录及实时荧光定量PCR | 第52-53页 |
| 1.1 Trizol法提取细胞总RNA | 第52页 |
| 1.2 RNA质量的检测 | 第52页 |
| 1.3 逆转录合成cDNA第一链 | 第52-53页 |
| 1.4 Real-time PCR实验 | 第53页 |
| 2. Western blot | 第53-55页 |
| 2.1 蛋白的提取及定量 | 第53-54页 |
| 2.2 蛋白的SDS-PAGE电泳 | 第54页 |
| 2.3 转膜 | 第54页 |
| 2.4 杂交 | 第54页 |
| 2.5 二次免疫印迹 | 第54-55页 |
| 3. 基因功能富集分析 | 第55页 |
| 4. 统计学方法 | 第55-56页 |
| 结果 | 第56-65页 |
| 1. DCAF13在肝癌中出现拷贝数的扩增和表达的上调 | 第56-57页 |
| 2. DCAF13在肝癌组织中RNA水平和蛋白水平的表达均明显上调 | 第57-59页 |
| 3. DCAF13高表达与肝癌的不良分级明显相关 | 第59-60页 |
| 4. DCAF13高表达是肝癌患者不良预后的独立危险因素 | 第60-61页 |
| 5. DCAF13可能是肝癌细胞周期的重要调控蛋白 | 第61-65页 |
| 讨论 | 第65-67页 |
| 参考文献 | 第67-69页 |
| 第三部: TDRKH在肝癌中的异常表达及临床意义 | 第69-83页 |
| 摘要 | 第69-70页 |
| Abstract | 第70-71页 |
| 前言 | 第71-72页 |
| 材料和方法 | 第72-74页 |
| 一、实验材料 | 第72页 |
| 1. 肝癌标本来源 | 第72页 |
| 2. TCGA数据库 | 第72页 |
| 3. 主要试剂 | 第72页 |
| 二、实验方法 | 第72-74页 |
| 1. RNA提取、逆转录及实时荧光定量PCR | 第72页 |
| 2. Western blot | 第72页 |
| 3. 生物信息学方法 | 第72页 |
| 4. 统计学处理 | 第72-74页 |
| 结果 | 第74-80页 |
| 1. TDRKH在肝癌组织中的表达明显升高 | 第74-75页 |
| 2. TDRKH表达与肝癌患者临床病理特征的相关性 | 第75-76页 |
| 3. TDRKH高表达是肝癌患者不良预后的独立预测因素 | 第76-77页 |
| 4. TDRKH可能是P53介导的细胞修复等过程的重要调节基因 | 第77-80页 |
| 讨论 | 第80-81页 |
| 参考文献 | 第81-83页 |
| 致谢 | 第83-85页 |
