| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 常用中英文缩写词 | 第10-11页 |
| 文献综述 | 第11-19页 |
| 引言 | 第19-20页 |
| 1 材料与方法 | 第20-37页 |
| 1.1 材料 | 第20-25页 |
| 1.1.1 实验动物和病毒来源 | 第20页 |
| 1.1.2 质粒和菌株 | 第20页 |
| 1.1.3 相关试剂 | 第20页 |
| 1.1.4 主要溶液配制 | 第20-24页 |
| 1.1.4.1 培养细菌所用溶液 | 第20-21页 |
| 1.1.4.2 琼脂糖凝胶电泳所用试剂 | 第21页 |
| 1.1.4.3 制备感受态细胞所用试剂 | 第21页 |
| 1.1.4.4 SDS-PAGE电泳所需溶液 | 第21-22页 |
| 1.1.4.5 蛋白提取、纯化所用溶液 | 第22-23页 |
| 1.1.4.6 ELISA试验所用溶液 | 第23页 |
| 1.1.4.7 Western Blot试验所用溶液 | 第23-24页 |
| 1.1.4.8 细胞转染和培养所需溶液 | 第24页 |
| 1.1.5 主要实验仪器 | 第24-25页 |
| 1.2 方法 | 第25-37页 |
| 1.2.1 Caspase-1 基因引物设计 | 第25页 |
| 1.2.2 鸡肝脏RNA提取及反转录 | 第25-26页 |
| 1.2.3 Caspase-1 基因扩增 | 第26-27页 |
| 1.2.4 Caspase-1 基因胶回收 | 第27页 |
| 1.2.5 Caspase-1/pMD18-T重组质粒的构建 | 第27-29页 |
| 1.2.5.1 感受态细胞的制备 | 第27页 |
| 1.2.5.2 目的基因与载体连接 | 第27-28页 |
| 1.2.5.3 重组质粒caspase-1/pMD18-T的转化 | 第28页 |
| 1.2.5.4 阳性克隆的鉴定 | 第28页 |
| 1.2.5.5 重组质粒抽提 | 第28-29页 |
| 1.2.6 Caspase-1 原核表达重组质粒的构建 | 第29页 |
| 1.2.6.1 Caspase-1 基因扩增 | 第29页 |
| 1.2.6.2 目的片段的胶回收 | 第29页 |
| 1.2.6.3 pET-32a质粒载体与目的片段的双酶切及连接 | 第29页 |
| 1.2.6.4 Caspase1/pET-32a重组质粒的转化及鉴定 | 第29页 |
| 1.2.7 Caspase1/pET-32a重组菌的表达及条件优化 | 第29-30页 |
| 1.2.8 Caspase1-His融合蛋白表达形式的鉴定 | 第30页 |
| 1.2.9 Caspase1-His融合蛋白的大量提取与纯化 | 第30-31页 |
| 1.2.10 动物免疫 | 第31页 |
| 1.2.11 抗体水平检测 | 第31-32页 |
| 1.2.11.1 间接ELISA检测抗体水平 | 第31页 |
| 1.2.11.2 Western blot检测 | 第31-32页 |
| 1.2.12 Caspase-1 真核表达重组质粒的构建 | 第32页 |
| 1.2.13 细胞转染及western blot检测 | 第32-34页 |
| 1.2.13.1 复苏DF-1 细胞 | 第32页 |
| 1.2.13.2 真核质粒去内毒素提取 | 第32-33页 |
| 1.2.13.3 转染 | 第33页 |
| 1.2.13.4 Western blot检测 | 第33-34页 |
| 1.2.14 LPS-ATP刺激细胞诱导caspase-1 | 第34页 |
| 1.2.14.1 细胞培养及处理 | 第34页 |
| 1.2.14.2 Western blot检测细胞蛋白 | 第34页 |
| 1.2.15 SPF鸡胚的孵化及攻毒实验 | 第34-35页 |
| 1.2.16 相对荧光定量 | 第35-36页 |
| 1.2.16.1 荧光定量引物设计 | 第35页 |
| 1.2.16.2 cDNA模板制备 | 第35页 |
| 1.2.16.3 RT-qPCR检测caspase-1 | 第35-36页 |
| 1.2.16.4 数据分析 | 第36页 |
| 1.2.17 免疫组化 | 第36-37页 |
| 2 结果与分析 | 第37-45页 |
| 2.1 Caspase-1 基因的克隆 | 第37页 |
| 2.2 Caspase1/pMD18-T重组质粒的构建 | 第37-38页 |
| 2.3 Caspase1/pET-32a重组菌的诱导表达及优化条件 | 第38-39页 |
| 2.4 Caspase1/pET-32a重组菌的蛋白表达形式鉴定及纯化 | 第39页 |
| 2.5 抗体水平检测 | 第39-40页 |
| 2.5.1 间接ELISA检测抗体水平 | 第39-40页 |
| 2.5.2 anti-caspase1抗体与caspase1-His融合蛋白的结合 | 第40页 |
| 2.6 Caspase1在DF-1 细胞中过表达检测结果 | 第40-42页 |
| 2.7 LPS联合ATP刺激DF-1 细胞诱导procaspase-1 活化 | 第42-43页 |
| 2.8 ALV-J诱导鸡肝组织中caspase-1 的表达结果 | 第43-45页 |
| 2.8.1 肝组织中caspase-1 转录水平的相对变化 | 第43页 |
| 2.8.2 肝组织中caspase-1 蛋白表达变化 | 第43-45页 |
| 3 讨论 | 第45-47页 |
| 4 结论 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
| 作者简介 | 第56页 |
