| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 1 前言 | 第11-18页 |
| 1.1 牛疱疹病毒Ⅰ型概述 | 第11-14页 |
| 1.1.1 BHV-1病原特性 | 第11页 |
| 1.1.2 BHV-1的分子生物学 | 第11-12页 |
| 1.1.3 BHV-1的感染和增殖 | 第12-13页 |
| 1.1.4 BHV-1引发的免疫反应 | 第13-14页 |
| 1.2 TLR和天然免疫 | 第14-17页 |
| 1.2.1 TLR的结构和分布 | 第14-15页 |
| 1.2.2 TLR对PAMPs的识别 | 第15页 |
| 1.2.3 TLR在天然免疫中的作用 | 第15-16页 |
| 1.2.4 TLR2和TLR9的抗病毒天然免疫 | 第16-17页 |
| 1.3 本文研究目的及意义 | 第17-18页 |
| 2 牛胚气管细胞Toll样受体1～10mRNA的表达 | 第18-23页 |
| 2.1 材料与方法 | 第18-21页 |
| 2.1.1 试验细胞 | 第18页 |
| 2.1.2 试验试剂 | 第18页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第18页 |
| 2.1.4 主要溶液 | 第18页 |
| 2.1.5 引物的设计合成 | 第18-19页 |
| 2.1.6 EBTr细胞的传代培养 | 第19页 |
| 2.1.7 总RNA提取 | 第19-20页 |
| 2.1.8 RT-PCR检测EBTr细胞TLR1～10mRNA的表达 | 第20-21页 |
| 2.2 结果 | 第21页 |
| 2.2.1 EBTr细胞的培养结果 | 第21页 |
| 2.2.2 EBTr细胞TLR1～10mRNA的表达 | 第21页 |
| 2.3 讨论 | 第21-22页 |
| 2.4 小结 | 第22-23页 |
| 3 BHV-1在牛胚气管细胞中的增殖规律 | 第23-35页 |
| 3.1 材料与方法 | 第23-28页 |
| 3.1.1 细胞株和毒株 | 第23页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第23页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第23页 |
| 3.1.4 主要溶液和培养基 | 第23-24页 |
| 3.1.5 引物和探针的设计合成 | 第24页 |
| 3.1.6 BHV-1病毒液的制备 | 第24-25页 |
| 3.1.7 阳性标准品的制备 | 第25-27页 |
| 3.1.8 TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立 | 第27-28页 |
| 3.1.9 BHV-1增殖规律的检测 | 第28页 |
| 3.1.10 EBTr细胞CPE观察 | 第28页 |
| 3.2 结果 | 第28-34页 |
| 3.2.1 BHV-1病毒的培养 | 第28-29页 |
| 3.2.2 病毒TCID_(50)的测定结果 | 第29页 |
| 3.2.3 普通PCR扩增结果 | 第29-30页 |
| 3.2.4 质粒PCR鉴定结果 | 第30页 |
| 3.2.5 BHV-1基因测序结果 | 第30页 |
| 3.2.6 BHV-1基因的标准曲线 | 第30-31页 |
| 3.2.7 TaqMan定量PCR重复性结果 | 第31-32页 |
| 3.2.8 BHV-1的增殖规律 | 第32-33页 |
| 3.2.9 BHV-1感染EBTr的CPE | 第33-34页 |
| 3.3 讨论 | 第34页 |
| 3.4 小结 | 第34-35页 |
| 4 BHV-1感染对牛胚气管细胞TLR2和TLR9mRNA表达的影响 | 第35-44页 |
| 4.1 材料与方法 | 第35-36页 |
| 4.1.1 细胞和病毒 | 第35页 |
| 4.1.2 主要试剂、仪器 | 第35页 |
| 4.1.3 定量PCR引物的设计合成 | 第35页 |
| 4.1.4 TLR2、TLR9及β-actin阳性标准品的制备 | 第35页 |
| 4.1.5 SYBR Green荧光定量PCR检测方法的建立 | 第35-36页 |
| 4.1.6 EBTr细胞分组及处理 | 第36页 |
| 4.1.7 全RNA提取和cDNA合成 | 第36页 |
| 4.1.8 定量PCR检测TLR2和TLR9mRNA水平的表达 | 第36页 |
| 4.1.9 统计学分析 | 第36页 |
| 4.2 结果 | 第36-42页 |
| 4.2.1 TLR2、TLR9和β-actin基因PCR扩增结果 | 第36-37页 |
| 4.2.2 各基因质粒DNA的PCR扩增 | 第37页 |
| 4.2.3 各基因的测序结果 | 第37-38页 |
| 4.2.4 TLR2、TLR9和β-actin的标准曲线 | 第38页 |
| 4.2.5 定量PCR溶解曲线 | 第38-39页 |
| 4.2.6 重复性试验结果 | 第39-40页 |
| 4.2.7 EBTr细胞的分组感染 | 第40-41页 |
| 4.2.8 BHV-1感染对EBTr细胞TLR2和TLR9mRNA表达的影响 | 第41-42页 |
| 4.3 讨论 | 第42-43页 |
| 4.4 小结 | 第43-44页 |
| 5 BHV-1感染对牛胚气管细胞TLR2蛋白表达的影响 | 第44-50页 |
| 5.1 材料与方法 | 第44-47页 |
| 5.1.1 试验细胞和病毒 | 第44页 |
| 5.1.2 试验试剂 | 第44页 |
| 5.1.3 主要仪器 | 第44页 |
| 5.1.4 溶液的配制 | 第44-45页 |
| 5.1.5 试验细胞分组及处理 | 第45页 |
| 5.1.6 Western blot检测EBTr细胞TLR2蛋白的表达 | 第45-47页 |
| 5.1.7 数据处理和分析 | 第47页 |
| 5.2 结果 | 第47-49页 |
| 5.2.1 蛋白样品浓度的测定结果 | 第47-48页 |
| 5.2.2 BHV-1感染对EBTr细胞TLR2蛋白表达的影响 | 第48-49页 |
| 5.3 讨论 | 第49页 |
| 5.4 小结 | 第49-50页 |
| 6 结论 | 第50-51页 |
| 致谢 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-59页 |
| 作者简介 | 第59页 |
