| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-29页 |
| ·自噬的概述 | 第13-16页 |
| ·自噬的分类 | 第13-14页 |
| ·自噬的发生过程 | 第14页 |
| ·自噬形成的调控分子 | 第14-16页 |
| ·Atg1/ULK1激酶复合体 | 第14-15页 |
| ·Beclin1-Vps34复合体 | 第15页 |
| ·Atg7依赖的两组类泛素链接过程 | 第15-16页 |
| ·自噬与哺乳动物的胚胎发育 | 第16-17页 |
| ·自噬在着床前的胚胎发育中的作用 | 第16页 |
| ·自噬在从胚胎发生到新生个体中的作用 | 第16-17页 |
| ·自噬在肝脏中的作用 | 第17-20页 |
| ·自噬降解肝脏蛋白 | 第18页 |
| ·自噬对肝脏脂肪代谢的作用 | 第18-19页 |
| ·自噬与肝脏病毒感染性疾病 | 第19页 |
| ·自噬与肝癌 | 第19-20页 |
| ·Beclin1基因 | 第20-25页 |
| ·Becn1基因及其在自噬中的作用 | 第20-22页 |
| ·Beclin1蛋白的修饰以及对细胞自噬的影响 | 第22-23页 |
| ·Beclin1蛋白磷酸化 | 第22页 |
| ·Beclin1的乙酰化和去乙酰化 | 第22页 |
| ·Beclin1的泛素化和类泛素化 | 第22-23页 |
| ·Beclin1与凋亡 | 第23页 |
| ·Beclin1与人类疾病 | 第23-25页 |
| ·Beclin1与肿瘤 | 第24页 |
| ·Beclin1与神经退行性疾病 | 第24-25页 |
| ·自噬在斑马鱼中的研究 | 第25-27页 |
| ·遗传操作在斑马鱼自噬研究中的运用 | 第25-26页 |
| ·调控自噬的化学药物在斑马鱼中的运用 | 第26-27页 |
| ·CRISPR/Cas9基因敲除技术的介绍 | 第27-29页 |
| 第二章 材料与方法 | 第29-51页 |
| ·实验动物 | 第29页 |
| ·主要仪器 | 第29-30页 |
| ·实验主要试剂 | 第30页 |
| ·实验试剂的配制 | 第30-34页 |
| ·分子克隆相关试剂 | 第30-31页 |
| ·全胚原位杂交相关试剂 | 第31-33页 |
| ·SDS-PAGE电泳和Western Blot相关试剂 | 第33-34页 |
| ·SDS-PAGE电泳相关试剂 | 第33-34页 |
| ·Western blot相关试剂 | 第34页 |
| ·实验方法 | 第34-51页 |
| ·斑马鱼Total RNA的提取 | 第34页 |
| ·cDNA第一链合成 | 第34-35页 |
| ·大肠杆菌E.coli化学感受态细胞的制备 | 第35-36页 |
| ·质粒转化与扩增 | 第36-37页 |
| ·mRNA的体外合成 | 第37页 |
| ·Guide RNA合成 | 第37-38页 |
| ·胚胎显微注射 | 第38-39页 |
| ·Cas9斑马鱼突变体的筛选 | 第39-42页 |
| ·F0斑马鱼构建与靶位点突变效率检测 | 第39-40页 |
| ·筛选F0突变体 | 第40页 |
| ·筛选突变的Fl成鱼 | 第40-41页 |
| ·Cas9斑马鱼突变体基因型的确定 | 第41-42页 |
| ·反义RNA探针的合成和纯化 | 第42-44页 |
| ·线性化反义RNA探针模板 | 第42-43页 |
| ·线性化探针模板的纯化 | 第43页 |
| ·反义RNA探针的转录与纯化 | 第43-44页 |
| ·斑马鱼全胚原位杂交 | 第44-45页 |
| ·胚胎的收集和固定 | 第44页 |
| ·原位杂交的步骤 | 第44-45页 |
| ·全胚免疫荧光染色 | 第45-46页 |
| ·冰冻切片的步骤 | 第46页 |
| ·冰冻切片免疫荧光染色 | 第46-47页 |
| ·冰冻切片的TUNEL实验 | 第47页 |
| ·斑马鱼胚胎总蛋白提取 | 第47-48页 |
| ·Western Blot实验步骤 | 第48-51页 |
| 第三章 实验结果 | 第51-67页 |
| ·斑马鱼becn1基因及其蛋白结构 | 第51-52页 |
| ·利用CRISPR/Cas9技术构建斑马鱼becn1突变体 | 第52-53页 |
| ·becn1突变体中Becn1蛋白水平的检测 | 第53-54页 |
| ·becn1突变体对细胞自噬影响 | 第54页 |
| ·becn1突变体表型初步分析 | 第54-55页 |
| ·becn1突变体导致斑马鱼肝脏肿大 | 第55-57页 |
| ·becn1突变体肝脏细胞的增殖和凋亡情况 | 第57-58页 |
| ·becn1突变体肝脏中积累大量的泛素化蛋白聚集体 | 第58-59页 |
| ·becn1突变体肝脏细胞大小和极性的变化 | 第59-61页 |
| ·becn1突变体产生内质网应激 | 第61-62页 |
| ·becn1突变体中Erk信号通路的探究 | 第62-63页 |
| ·利用CRISPR/Cas9技术构建atg5和atg7突变体 | 第63-67页 |
| ·利用CRISPR/Cas9技术构建atg5突变体 | 第63-64页 |
| ·利用CRISPR/Cas9技术构建atg7突变体 | 第64-67页 |
| 第四章 总结与讨论 | 第67-71页 |
| ·becn1对斑马鱼胚胎发育的影响 | 第67页 |
| ·becn1对斑马鱼肝脏细胞增殖的影响 | 第67-68页 |
| ·becn1对斑马鱼肝脏细胞极性的影响 | 第68页 |
| ·becn1突变体与内质网应激 | 第68-69页 |
| ·becn1突变体与atg5和atg7突变体的不同 | 第69-71页 |
| 参考文献 | 第71-85页 |
| 致谢 | 第85页 |
