| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-22页 |
| ·引言 | 第11页 |
| ·EV71疫苗的研究进展 | 第11-12页 |
| ·家蚕生物反应器的研究进展 | 第12-19页 |
| ·家蚕核型多角体病毒(BmNPV)表达系统 | 第13页 |
| ·piggyBac转座子介导的转基因遗传操作系统 | 第13-17页 |
| ·家蚕丝腺生物反应器的存在的问题分析和发展趋势 | 第17-19页 |
| ·本项目的研究意义、内容及技术路线 | 第19-22页 |
| ·研究背景与意义 | 第19-20页 |
| ·研究内容 | 第20-21页 |
| ·技术路线图 | 第21-22页 |
| 第二章 转基因家蚕介导的EV71疫苗的表达研究 | 第22-49页 |
| ·引言 | 第22页 |
| ·材料与试剂 | 第22-26页 |
| ·家蚕品系及饲养条件 | 第22页 |
| ·主要药品、试剂和试验仪器 | 第22-26页 |
| ·实验方法 | 第26-42页 |
| ·转基因质粒的构建 | 第26-34页 |
| ·体外转录Helper mRNA(IFP2) | 第34-35页 |
| ·家蚕胚胎显微注射和荧光筛选方法 | 第35-36页 |
| ·Inverse PCR检测插入位点 | 第36-37页 |
| ·家蚕丝腺RNA提取 | 第37页 |
| ·RT-PCR和QPCR | 第37-39页 |
| ·家蚕活性蛋白的分离纯化 | 第39-41页 |
| ·家蚕活性蛋白的鉴定 | 第41-42页 |
| ·结果分析 | 第42-47页 |
| ·丝胶茧阳性品系获得 | 第42-44页 |
| ·VP1基因在家蚕个体中表达分析 | 第44-45页 |
| ·VP1蛋白的分离纯化 | 第45-47页 |
| ·VP1蛋白的活性鉴定 | 第47页 |
| ·讨论 | 第47-48页 |
| ·本章小结 | 第48-49页 |
| 第三章 基于CRISPR/CAS9家蚕基因组编辑技术的EV71疫苗的表达研究 | 第49-62页 |
| ·引言 | 第49页 |
| ·材料与试剂 | 第49-50页 |
| ·家蚕品系及饲养条件 | 第49-50页 |
| ·主要药品、试剂和试验仪器 | 第50页 |
| ·实验方法 | 第50-57页 |
| ·Donor质粒的构建方法 | 第50-52页 |
| ·体外转录Cas9 mRNA、Sericin1 sgRNAs和Bmku70 dsRNA | 第52-55页 |
| ·家蚕胚胎显微注射和荧光筛选方法 | 第55页 |
| ·突变体基因组DNA提取以及突变检测 | 第55-57页 |
| ·结果分析 | 第57-60页 |
| ·基因组整合位点及Donor载体设计 | 第57页 |
| ·蛹期GO代嵌合体红色荧光的表达 | 第57-58页 |
| ·Cas9/sgRNA切割效率的检测 | 第58-60页 |
| ·讨论 | 第60-61页 |
| ·小结 | 第61-62页 |
| 结论 | 第62-63页 |
| 引用文献 | 第63-68页 |
| 致谢 | 第68页 |