| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 缩略表 | 第7-11页 |
| 1 引言 | 第11-22页 |
| ·文献综述 | 第11-21页 |
| ·植物在低磷胁迫下生理生化的研究进展 | 第11-13页 |
| ·植物根系形态反应 | 第11-12页 |
| ·植物根系分泌物质的变化 | 第12-13页 |
| ·植物磷营养效率相关基因研究进展 | 第13-15页 |
| ·磷转运蛋白基因及其生物学功能 | 第13-14页 |
| ·磷营养相关转录因子基因及其生物学功能 | 第14页 |
| ·根系分泌物相关基因及其生物学功能 | 第14-15页 |
| ·亚磷酸盐脱氢酶的研究进展 | 第15-21页 |
| ·亚磷酸盐脱氢酶的酶学特性 | 第15-16页 |
| ·亚磷酸盐脱氢酶在辅酶再生系统中的应用 | 第16-18页 |
| ·亚磷酸盐脱氢酶在植物基因工程上的应用 | 第18-20页 |
| ·PTXD基因作为新的选择标记基因的应用 | 第20-21页 |
| ·本论文的研究目的及意义 | 第21-22页 |
| 2 材料与方法 | 第22-44页 |
| ·材料 | 第22-27页 |
| ·实验材料 | 第22页 |
| ·试剂和工具酶 | 第22-23页 |
| ·试剂 | 第22-23页 |
| ·工具酶 | 第23页 |
| ·引物 | 第23-24页 |
| ·试剂配制 | 第24-27页 |
| ·主要仪器设备 | 第27页 |
| ·实验方法 | 第27-44页 |
| ·PsPtx基因的克隆 | 第27-33页 |
| ·土壤宏基因组DNA的提取 | 第27-28页 |
| ·核酸琼脂糖凝胶电泳 | 第28页 |
| ·PsPtx基因的扩增 | 第28-29页 |
| ·DNA琼脂糖凝胶电泳纯化回收目的片段 | 第29-30页 |
| ·PCR产物及载体的酶切 | 第30-31页 |
| ·PsPtx的酶切 | 第30页 |
| ·载体pET30a(+)和pBI121-KA的酶切 | 第30页 |
| ·DNA酶切产物的溶液纯化 | 第30-31页 |
| ·DNA连接和转化 | 第31-32页 |
| ·连接 | 第31页 |
| ·转化 | 第31-32页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞制备 | 第31页 |
| ·大肠杆菌DNA转化 | 第31-32页 |
| ·重组子的筛选 | 第32页 |
| ·重组质粒pET(PsPtx)和pBI121(PsPtx)提取和测序 | 第32-33页 |
| ·质粒DNA提取 | 第32-33页 |
| ·菌种的保存 | 第33页 |
| ·测序 | 第33页 |
| ·生物信息学分析 | 第33-34页 |
| ·PTDH的诱导表达 | 第34-36页 |
| ·重组质粒转化BL21(DE3)感受态 | 第34页 |
| ·PTDH的诱导表达 | 第34页 |
| ·菌液的超声裂解 | 第34页 |
| ·PTDH蛋白电泳样品的制备 | 第34-35页 |
| ·SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE） | 第35-36页 |
| ·SDS-PAGE胶的制备 | 第35-36页 |
| ·上样电泳 | 第36页 |
| ·蛋白胶快速染色及脱色 | 第36页 |
| ·烟草种子的消毒及无菌苗的培养 | 第36页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备 | 第36-37页 |
| ·质粒pBI121(PsPtx)转化农杆菌感受态细胞及重组子鉴定 | 第37页 |
| ·用于转化烟草的农杆菌的培养 | 第37页 |
| ·烟草叶盘法转化及转基因烟草的无菌培养 | 第37-38页 |
| ·PsPtx转基因烟草阳性植株的鉴定 | 第38-40页 |
| ·PsPtx转基因烟草植株基因组的提取 | 第38页 |
| ·PCR鉴定 | 第38-40页 |
| ·PsPtx转基因植株空间特异性表达 | 第40-42页 |
| ·RNA的提取 | 第40页 |
| ·RNA电泳 | 第40页 |
| ·反转录合成cDNA | 第40-41页 |
| ·RT-PCR | 第41-42页 |
| ·18S rRNA基因的RT-PCR | 第41页 |
| ·PsPtx基因的RT-PCR | 第41-42页 |
| ·PsPtx转基因烟草子一代功能分析 | 第42-44页 |
| ·亚磷酸盐胁迫下的平板试验 | 第42页 |
| ·显性标记基因实验 | 第42-43页 |
| ·杂草控制系统实验 | 第43-44页 |
| 3 结果与分析 | 第44-60页 |
| ·PsPtx基因的克隆 | 第44-47页 |
| ·PsPtx基因扩增 | 第44页 |
| ·PsPtx PCR产物及载体pET30a(+)、pBI121-KA的酶切 | 第44-45页 |
| ·pET(PsPtx)和pBI121(PsPtx)阳性重组克隆的鉴定及质粒提取 | 第45-47页 |
| ·PsPtx的生物信息学分析 | 第47-50页 |
| ·PTDH的诱导表达 | 第50-51页 |
| ·PsPtx基因的烟草叶盘法转化以及转基因植株的室外培养 | 第51-53页 |
| ·PsPtx基因的烟草叶盘法转化 | 第51-52页 |
| ·转基因植株的室外培养 | 第52页 |
| ·PsPtx转基因烟草阳性植株的鉴定 | 第52-53页 |
| ·PsPtx转基因烟草的基因表达分析 | 第53-54页 |
| ·亚磷酸盐胁迫实验 | 第54-60页 |
| ·亚磷酸盐胁迫水平平板实验 | 第54-56页 |
| ·亚磷酸盐胁迫垂直平板实验 | 第56页 |
| ·显性标记实验 | 第56-58页 |
| ·杂草控制系统实验 | 第58-60页 |
| 4 总结与讨论 | 第60-62页 |
| 参考文献 | 第62-68页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文和研究成果 | 第68-69页 |
| 致谢 | 第69页 |
