| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 1 引言 | 第10-16页 |
| ·枯萎病 | 第10页 |
| ·枯萎病菌 | 第10页 |
| ·枯萎病发病特征 | 第10页 |
| ·尖孢镰刀菌致病机理研究现状 | 第10-12页 |
| ·RNA 沉默途径及其研究现状 | 第12-14页 |
| ·小 RNA 的研究进展 | 第12页 |
| ·RNA 沉默机制 | 第12-13页 |
| ·Qip 基因功能在 RNA 沉默途径中的研究进展 | 第13-14页 |
| ·本研究的实验目的和意义 | 第14页 |
| ·研究内容与技术路线 | 第14-16页 |
| ·研究内容 | 第14-15页 |
| ·技术路线 | 第15-16页 |
| 2 实验材料和方法 | 第16-30页 |
| ·实验材料、试剂与仪器 | 第16-17页 |
| ·实验材料 | 第16页 |
| ·实验试剂 | 第16-17页 |
| ·实验仪器 | 第17页 |
| ·实验方法 | 第17-30页 |
| ·尖孢镰刀菌 Qip 基因的分离和鉴定 | 第17-20页 |
| ·Qip 基因敲除载体的构建 | 第20-23页 |
| ·尖孢镰刀菌对潮霉素和新霉素的抗性检测 | 第23-24页 |
| ·实验所用抗生素配制浓度 | 第24页 |
| ·尖孢镰刀菌原生质体的制备 | 第24页 |
| ·PEG-CaCl_2介导的丝状真菌遗传转化 | 第24-25页 |
| ·用于 PCR 检测的真菌 DNA 快速提取方法 | 第25-26页 |
| ·PCR 验证 Qip 基因敲除转化子 | 第26页 |
| ·Southern 杂交验证 Qip 基因敲除突变体 | 第26-27页 |
| ·突变体和野生型菌株菌落形态比较 | 第27-28页 |
| ·突变体和野生型菌株菌落边缘形态比较 | 第28页 |
| ·突变体和野生型菌株菌丝形态比较 | 第28页 |
| ·突变体和野生型菌株孢子形态比较 | 第28页 |
| ·突变体和野生型菌株对甘蓝幼苗的致病力比较 | 第28页 |
| ·对突变体和野生型菌株进行 GFP 基因的遗传转化 | 第28-30页 |
| 3 结果与讨论 | 第30-40页 |
| ·尖孢镰刀菌 Qip 基因的分离和鉴定 | 第30-32页 |
| ·Qip 基因同源敲除载体的构建 | 第32-33页 |
| ·Qip 基因上下游侧翼片段扩增 | 第32-33页 |
| ·Qip 基因敲除载体构建菌液 PCR 检测结果 | 第33页 |
| ·尖孢镰刀菌对潮霉素和新霉素的最佳抑菌浓度 | 第33-34页 |
| ·转化子 PCR 验证结果 | 第34页 |
| ·Southern 杂交验证 Qip 基因敲除突变体 | 第34-35页 |
| ·突变体和野生型菌株表型比较结果 | 第35-36页 |
| ·突变体和野生型菌株对甘蓝幼苗的致病力比较结果 | 第36-37页 |
| ·GFP 标记突变体和野生型菌株 | 第37-40页 |
| ·PCR 验证转化子中 GFP 基因 | 第37-38页 |
| ·尖孢镰刀菌野生型菌株 A8 和△Qip 突变株中荧光检测 | 第38-40页 |
| 4 结论 | 第40-41页 |
| 致谢 | 第41-43页 |
| 参考文献 | 第43-49页 |
| 附录A Qip 基因及上下游侧翼序列 | 第49-52页 |
| 附录B Qip cDNA 序列 | 第52-54页 |
| 附录C 潮霉素基因（HYG）序列 | 第54-56页 |
| 附录D 新霉素基因（Neo）序列 | 第56-58页 |
| 附录E GFP 基因序列 | 第58-60页 |
| 附录F 缩略词表 | 第60-62页 |
| 附录G 培养基配制 | 第62-64页 |
| 作者简历 | 第64页 |
