| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-21页 |
| 1 猪流行性腹泻综述 | 第12-17页 |
| ·猪流行性腹泻 | 第12-17页 |
| ·猪流行性腹泻病毒形态特征与基因组结构特征 | 第12-13页 |
| ·猪流行性病毒的复制 | 第13-14页 |
| ·猪流行性腹泻病毒 S 蛋白的结构与功能 | 第14页 |
| ·猪流行性腹泻的流行病学 | 第14-15页 |
| ·猪流行性腹泻临床症状、发病机理及病理变化 | 第15页 |
| ·猪流行性腹泻感染后产生抗体的保护功能研究 | 第15页 |
| ·猪流行性腹泻检测方法研究进展 | 第15-16页 |
| ·猪流行性腹泻疫苗研究进展 | 第16-17页 |
| ·猪流行性腹泻病毒结构蛋白单克隆抗体研究进展 | 第17页 |
| 2 酿酒酵母表面展示系统综述 | 第17-20页 |
| ·酿酒酵母同源重组技术 | 第17-18页 |
| ·酿酒酵母表面展示系统 | 第18页 |
| ·酿酒酵母表面展示系统的构成 | 第18页 |
| ·酿酒酵母表达载体启动子 | 第18-19页 |
| ·半乳糖激酶启动子 | 第18-19页 |
| ·3-磷酸甘油脱氢酶启动子 | 第19页 |
| ·酿酒酵母表面表达系统的应用 | 第19页 |
| ·酿酒酵母表面展示系统的特点 | 第19-20页 |
| 3 本研究的目的和意义 | 第20-21页 |
| 第二章 PEDV S1-1 基因的克隆及表达 | 第21-49页 |
| 1 材料 | 第21-24页 |
| ·仪器设备 | 第21页 |
| ·毒株、菌种、质粒 | 第21页 |
| ·主要生化试剂 | 第21页 |
| ·试剂、培养基的配制 | 第21-23页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)相关试剂的配制 | 第23-24页 |
| 2 方法 | 第24-35页 |
| ·引物设计 | 第24页 |
| ·病毒 RNA 的提取 | 第24页 |
| ·RT-PCR | 第24-25页 |
| ·PCR 产物纯化 | 第25页 |
| ·连接、转化 | 第25-28页 |
| ·重组表达载体 pET-32a-S1-1 的构建 | 第28-29页 |
| ·重组质粒 pET-32a-S1-1 转化 BL21(DE3)plysS 及鉴定 | 第29页 |
| ·重组菌 BL21(DE3)plysS/pET-32a-S1-1 诱导表达及表达条件的优化 | 第29-30页 |
| ·重组蛋白 His-S1-1 包涵体的纯化、复性 | 第30-32页 |
| ·重组纯化蛋白 His-S1-1 反应原性的检测 | 第32页 |
| ·PEDV S1-1 基因重组表达载体 pGEX-4T-1-S1-1 的构建 | 第32-33页 |
| ·重组质粒 pGEX-4T-1-S1-1 转化 BL21(DE3)plysS 及鉴定 | 第33-34页 |
| ·重组菌 BL21(DE3)plysS/pGEX-4T-1-S1-1 诱导表达及表达条件的优化 | 第34页 |
| ·重组蛋白 GST-S1-1 包涵体的纯化、复性 | 第34-35页 |
| ·重组纯化蛋白 GST-S1-1 反应原性的检测 | 第35页 |
| 3 结果 | 第35-47页 |
| ·PEDV S1-1 基因的扩增 | 第35-36页 |
| ·重组质粒 pEASY-T3-S1-1 的酶切鉴定 | 第36页 |
| ·S1-1 基因测序 | 第36-37页 |
| ·重组表达质粒 pET-32a-S1-1 转化 JM109 的菌落 PCR 鉴定 | 第37-38页 |
| ·重组表达质粒 pET-32a-S1-1 转化 BL21(DE3)plysS 的菌落 PCR 鉴定 | 第38页 |
| ·重组质粒 pET-32a-S1-1 双酶切鉴定 | 第38-39页 |
| ·重组菌 BL21(DE3)plysS/pET-32a-S1-1 的 SDS-PAGE | 第39页 |
| ·重组蛋白 His-S1-1 诱导条件优化 | 第39-41页 |
| ·重组蛋白 His-S1-1 可溶性分析 | 第41页 |
| ·重组蛋白 His-S1-1 包涵体纯化、复性 | 第41-42页 |
| ·重组蛋白 His-S1-1 活性的检测结果 | 第42页 |
| ·重组表达质粒 pGEX-4T-1-S1-1 转化 JM109 的菌落 PCR 鉴定 | 第42-43页 |
| ·重组表达质粒 pGEX-4T-1-S1-1 转化 BL21(DE3)plysS 菌落 PCR 鉴定 | 第43页 |
| ·重组质粒 pGEX-4T-1-S1-1 双酶切鉴定 | 第43-44页 |
| ·重组菌 BL21(DE3)plysS/ pGEX-4T-1-S1-1 的 SDS-PAGE | 第44页 |
| ·重组蛋白 GST-S1-1 诱导条件优化 | 第44-46页 |
| ·重组蛋白 GST-S1-1 可溶性分析 | 第46页 |
| ·重组蛋白 GST-S1-1 包涵体纯化、复性 | 第46-47页 |
| ·GST-S1-1 蛋白活性的检测结果 | 第47页 |
| 4 讨论 | 第47-49页 |
| 第三章 猪流行性腹泻病毒 S1-1 蛋白单克隆抗体的制备 | 第49-61页 |
| 1 材料 | 第49-50页 |
| ·试验动物、抗原和细胞株 | 第49页 |
| ·主要仪器设备 | 第49页 |
| ·主要试剂、培养基的配制 | 第49-50页 |
| 2 试验方法和步骤 | 第50-54页 |
| ·动物免疫 | 第50页 |
| ·间接 ELISA 检测方法的建立 | 第50页 |
| ·小鼠免疫抗体效价测定 | 第50-51页 |
| ·细胞融合 | 第51-52页 |
| ·SP2/0 骨髓瘤细胞的准备 | 第51页 |
| ·脾淋巴细胞的制备 | 第51页 |
| ·饲养细胞的制备 | 第51页 |
| ·细胞融合 | 第51-52页 |
| ·杂交瘤细胞筛选 | 第52页 |
| ·阳性杂交瘤细胞的亚克隆、冻存和复苏 | 第52-53页 |
| ·阳性杂交瘤细胞克隆化 | 第52页 |
| ·阳性杂交瘤细胞的冻存 | 第52页 |
| ·杂交瘤细胞的复苏 | 第52-53页 |
| ·单克隆抗体的生产 | 第53页 |
| ·抗体的纯化 | 第53页 |
| ·单克隆抗体的鉴定 | 第53-54页 |
| ·Western Blot 鉴定 | 第53页 |
| ·腹水效价的测定 | 第53-54页 |
| ·杂交瘤细胞株抗体分泌稳定性的测定 | 第54页 |
| 3 结果 | 第54-59页 |
| ·间接 ELISA 检测方法的建立 | 第54-55页 |
| ·小鼠免疫抗体效价测定结果 | 第55-57页 |
| ·杂交瘤细胞株的建立 | 第57页 |
| ·单克隆抗体特异性鉴定 | 第57-58页 |
| ·单克隆抗体腹水效价检测 | 第58页 |
| ·单克隆抗体腹水的纯化 | 第58-59页 |
| ·杂交瘤细胞株抗体分泌稳定性 | 第59页 |
| 4 讨论 | 第59-61页 |
| 第四章 葡萄糖诱导的酿酒酵母表面展示质粒的构建 | 第61-81页 |
| 1 材料 | 第61-62页 |
| ·仪器设备 | 第61页 |
| ·菌种 | 第61页 |
| ·主要生化试剂 | 第61页 |
| ·试剂、培养基的配制 | 第61-62页 |
| 2 方法和步骤 | 第62-73页 |
| ·3-磷酸甘油脱氢酶（GPD1）启动子的克隆及测序 | 第62-63页 |
| ·质粒 pYD1-S1-1 的同源重组 | 第63-67页 |
| ·质粒 pYD1-P12-S1-1 的同源重组 | 第67-70页 |
| ·质粒 pYD1-P22-S1-1 的酶切连接 | 第70-73页 |
| ·阳性重组质粒 pYD1-GPD1-S1-1 转化酵母感受态 | 第73页 |
| 3 结果 | 第73-79页 |
| ·PCR 扩增 GPD1 启动子 | 第73页 |
| ·pEASY-T3-GPD1 菌落 PCR 鉴定结果 | 第73-74页 |
| ·pEASY-T3-GPD1 质粒测序结果 | 第74-75页 |
| ·质粒 pYD1-S1-1 的同源重组酵母菌落 PCR 鉴定结果 | 第75-76页 |
| ·重组酵母质粒 pYD1-P12-S1-1 转化 JM109 菌落 PCR 鉴定结果 | 第76页 |
| ·重组酵母质粒 pYD1-P12-S1-1 测序结果 | 第76-77页 |
| ·重组质粒 pYD1-P22-S1-1 测序结果 | 第77-78页 |
| ·JM109/pYD1-GPD1-S1-1 菌落 PCR 鉴定结果 | 第78页 |
| ·重组质粒 pYD1-GPD1-S1-1 提取结果 | 第78页 |
| ·重组质粒 pYD1-GPD1-S1-1 的测序 | 第78-79页 |
| ·阳性重组菌 EBY-100/pYD1-GPD1-S1-1 菌落 PCR 鉴定结果 | 第79页 |
| 4 讨论 | 第79-81页 |
| 全文总结 | 第81-82页 |
| 参考文献 | 第82-88页 |
| 致谢 | 第88-89页 |
| 论文发表情况 | 第89-90页 |
