| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-12页 |
| 符号和縮略语说明 | 第12-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-38页 |
| 第一节 灵芝及其药用价值研究进展 | 第14-17页 |
| ·灵芝三萜的化学结构研究 | 第15-16页 |
| ·灵芝三萜的药理作用研究 | 第16-17页 |
| 第二节 灵芝三萜的生物合成研究 | 第17-21页 |
| ·灵芝三萜生物合成途径 | 第17-18页 |
| ·灵芝基因组解析 | 第18-19页 |
| ·环境因素对灵芝三萜含量的影响 | 第19-21页 |
| 第三节 RNA干扰技术 | 第21-26页 |
| ·RNA干扰技术概述 | 第22-24页 |
| ·RNA干扰在丝状真菌中的应用 | 第24-26页 |
| ·RNA干扰作为工具的优劣及前景展望 | 第26页 |
| 第四节 NADPH氧化酶对生长发育、次级代谢的影响 | 第26-35页 |
| ·NADPH氧化酶概述 | 第27-31页 |
| ·NADPH氧化酶在细胞分化和功能上的作用 | 第31-34页 |
| ·发展与展望 | 第34-35页 |
| 第五节 本论文的研究意义及主要内容 | 第35-38页 |
| ·研究意义 | 第35页 |
| ·研究内容 | 第35-38页 |
| 第二章 灵芝基因沉默体系的建立 | 第38-70页 |
| 前言 | 第38-39页 |
| 第一节 灵芝电转化体系的建立 | 第39-45页 |
| 1 实验材料 | 第39页 |
| 2 实验方法 | 第39-42页 |
| 3 结果分析 | 第42-45页 |
| 第二节 灵芝RNAi沉默载体的构建及转化 | 第45-62页 |
| 1 实验材料 | 第45-46页 |
| 2 实验方法 | 第46-55页 |
| 3 结果分析 | 第55-62页 |
| 第三节 多基因沉默体系的建立 | 第62-70页 |
| 1 实验材料 | 第62页 |
| 2 实验方法 | 第62-64页 |
| 3 结果分析 | 第64-67页 |
| 4 本章讨论 | 第67-70页 |
| 第三章 灵芝Nox基因家族功能分析 | 第70-94页 |
| 前言 | 第70-71页 |
| 1 实验材料 | 第71-72页 |
| ·菌株、质粒、试剂 | 第71页 |
| ·菌株培养 | 第71-72页 |
| 2 实验方法 | 第72-77页 |
| ·NADPH氧化酶基因克隆及测序 | 第72-73页 |
| ·生物信息学分析序列特征 | 第73页 |
| ·NADPH氧化酶基因沉默载体的构建及转化 | 第73-74页 |
| ·转化子的验证 | 第74页 |
| ·Real time PCR检测基因转录水平 | 第74页 |
| ·胞内ROS检测 | 第74-75页 |
| ·三萜测定方法 | 第75-76页 |
| ·灵芝袋栽培养 | 第76-77页 |
| 3 实验分析 | 第77-90页 |
| ·灵芝NADPH氧化酶功能域及进化树分析 | 第77-79页 |
| ·灵芝NADPH氧化酶基因沉默转化子筛选 | 第79-80页 |
| ·灵芝NADPH氧化酶基因沉默突变体ROS生成受阻 | 第80-83页 |
| ·灵芝NADPH氧化酶基因通过ROS调控三萜生物合成 | 第83-85页 |
| ·子实体形成中NADPH氧化酶基因是必需的 | 第85-88页 |
| ·灵芝NADPH氧化酶基因沉默菌株对过氧化氢耐受性降低 | 第88-90页 |
| 4 本章讨论 | 第90-94页 |
| 第四章 NADPH氧化酶产生的ROS通过激活Ca~(2+)信号通路调控灵芝三萜和菌丝分叉 | 第94-116页 |
| 前言 | 第94-95页 |
| 1 实验材料 | 第95页 |
| ·菌株、质粒、试剂 | 第95页 |
| ·菌株培养 | 第95页 |
| 2 实验方法 | 第95-100页 |
| ·胞内Ca~(2+)荧光检测 | 第95-96页 |
| ·胞内Ca~(2+)动态检测 | 第96-97页 |
| ·灵芝Ca~(2+)信号通路基因的预测 | 第97页 |
| ·Ca~(2+)信号通路基因响应ROS检测 | 第97-100页 |
| ·三萜测定方法 | 第100页 |
| ·菌丝分叉检测 | 第100页 |
| 3 结果分析 | 第100-112页 |
| ·NADPH氧化酶基因沉默菌株中Ca~(2+)浓度的检测 | 第100-102页 |
| ·NADPH氧化酶产生的ROS激活钙离子通道 | 第102-103页 |
| ·灵芝Ca~(2+)信号通路基因响应ROS刺激 | 第103-107页 |
| ·NADPH氧化酶基因沉默对Ca~(2+)信号通路基因转录的影响 | 第107页 |
| ·NADPH氧化酶产生的ROS通过Ca~(2+)信号通路调控灵芝三萜生物合成 | 第107-110页 |
| ·NADPH氧化酶基因沉默对菌丝分叉的影响 | 第110-112页 |
| 4 本章讨论 | 第112-116页 |
| 全文总结 | 第116-118页 |
| 参考文献 | 第118-132页 |
| 创新点 | 第132-134页 |
| 文章发表情况 | 第134-136页 |
| 附录Ⅰ | 第136-138页 |
| 附录Ⅱ | 第138-140页 |
| 致谢 | 第140页 |
