| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-13页 |
| 第一章 膜蛋白简介 | 第13-19页 |
| ·膜蛋白功能简介 | 第13-15页 |
| ·受体蛋白(receptor) | 第13-14页 |
| ·转运蛋白(transporter) | 第14-15页 |
| ·细胞粘附蛋白(Cell adhesion molecule) | 第15页 |
| ·酶蛋白(Enzyme) | 第15页 |
| ·膜蛋白拓扑学构型 | 第15-17页 |
| ·内在膜蛋白(Integral membrane protein) | 第15-16页 |
| ·外周膜蛋白(Peripheral membrane protein) | 第16-17页 |
| ·膜蛋白三维结构研究 | 第17-18页 |
| 参考文献 | 第18-19页 |
| 第二章 核磁共振基本理论和方法综述 | 第19-47页 |
| ·核磁共振研究蛋白质结构和功能简介 | 第19页 |
| ·核磁共振基本理论 | 第19-24页 |
| ·磁共振现象(Magnetic resonance) | 第19-20页 |
| ·化学屏蔽(Chemical shielding) | 第20-21页 |
| ·标量耦合(Scalar coupling) | 第21-22页 |
| ·偶极耦合(Dipolar coupling) | 第22页 |
| ·四极作用(Quadrupolar interaction) | 第22页 |
| ·射频场(Radio frequency interaction) | 第22-23页 |
| ·脉冲实验及傅立叶变换(FT-NMR) | 第23-24页 |
| ·液体核磁研究蛋白质结构和功能的实验方法 | 第24-30页 |
| ·自旋回波(Spin echo) | 第24-26页 |
| ·化学位移相关谱(Correlation spectroscopy,COSY) | 第26-27页 |
| ·全相关谱(Total correlation spectroscopy,TOCSY) | 第27-28页 |
| ·交叉弛豫实验(Cross relaxation experiments) | 第28-29页 |
| ·INEPT(Insensitive Nuclei Enhanced by Polarization Transfer) | 第29-30页 |
| ·Trosy(Transverse relaxation optimized spectroscopy) | 第30页 |
| ·固体核磁研究蛋白质的常用实验技术及相关理论 | 第30-36页 |
| ·魔角旋转(Magic angle spinning,MAS) | 第30-31页 |
| ·重偶和去偶(Recoupling and decoupling under MAS) | 第31-32页 |
| ·交叉极化(Cross polarization,CP) | 第32-33页 |
| ·自旋扩散(Spin diffusion) | 第33-34页 |
| ·频率择性的异核交叉极化(SPECIFIC CP) | 第34-36页 |
| ·蛋白质特殊标记技术的应用 | 第36-42页 |
| ·氘代 | 第36页 |
| ·蛋白质片断标记 | 第36-37页 |
| ·选择性氨基酸残基标记 | 第37页 |
| ·~(13)C稀释标记 | 第37-39页 |
| ·甲基同位素标记 | 第39页 |
| ·位点特异性非天然氨基酸标记 | 第39-40页 |
| ·细胞外标记策略 | 第40-42页 |
| 参考文献 | 第42-47页 |
| 第三章 应用液体核磁方法解析结核杆菌“外膜”蛋白溶液结构 | 第47-75页 |
| ·结核分枝杆菌及外膜蛋白Rv0899简介 | 第47-54页 |
| ·引言 | 第47-48页 |
| ·结核分枝杆菌的形态及基因特征 | 第48-49页 |
| ·结核分枝杆菌的细胞膜的成分及结构 | 第49-50页 |
| ·结核分枝杆菌的外膜通道蛋白 | 第50-52页 |
| ·结核分枝杆菌的通道蛋白Rv0899 | 第52-54页 |
| ·蛋白质溶液结构及动力学的核磁共振研究方法 | 第54-58页 |
| ·同位素标记样品制备 | 第54页 |
| ·化学位移归属 | 第54-55页 |
| ·蛋白质结构约束信息 | 第55-56页 |
| ·蛋白质动力学信息 | 第56-58页 |
| ·实验材料与方法 | 第58-61页 |
| ·生物信息学调研 | 第58-59页 |
| ·分子克隆 | 第59页 |
| ·蛋白质表达 | 第59页 |
| ·蛋白质纯化 | 第59-60页 |
| ·MTSL标记方法 | 第60页 |
| ·超速离心分析和磷脂重组装实验 | 第60页 |
| ·NMR、EPR和DEER实验及结构计算 | 第60-61页 |
| ·ITC热滴定分析和NMR滴定结合实验 | 第61页 |
| ·结果和讨论 | 第61-70页 |
| ·Rv0899结构域初步分析 | 第61-63页 |
| ·Rv0899三维结构计算 | 第63-67页 |
| ·Rv0899作为通道蛋白的可能性 | 第67页 |
| ·Rv0899在细胞外膜上的存在形式 | 第67-68页 |
| ·Rv0899可能的生物学功能 | 第68-70页 |
| ·总结和展望 | 第70-72页 |
| 参考文献 | 第72-75页 |
| 第四章 发展固体核磁同核交叉极化方法优化蛋白质主链归属 | 第75-95页 |
| ·固体核磁方法研究蛋白质结构的简介 | 第75-79页 |
| ·实验材料和方法 | 第79-81页 |
| ·样品制备 | 第79页 |
| ·核磁实验设置 | 第79-80页 |
| ·数据处理 | 第80-81页 |
| ·结果和讨论 | 第81-90页 |
| ·基本理论 | 第81-82页 |
| ·基于BSH-CP的PEG-Ubiquitin二维核磁谱 | 第82-87页 |
| ·用于MPD-Ubiquitin主链归属的全套三维核磁谱 | 第87-90页 |
| ·总结及应用前景展望 | 第90-92页 |
| 参考文献 | 第92-95页 |
| 第五章 膜蛋白样品中去垢剂的定量检测及浓度控制 | 第95-109页 |
| ·膜蛋白样品中去垢剂及检测方法简介 | 第95-99页 |
| ·前言 | 第95页 |
| ·去垢剂在膜蛋白样品制备中的作用 | 第95-97页 |
| ·去垢剂定量检测方法简介 | 第97-99页 |
| ·实验材料和方法 | 第99-100页 |
| ·去垢剂分子的相变温度测定 | 第99页 |
| ·气相色谱定量分析过程 | 第99页 |
| ·用超滤浓缩管去除膜蛋白样品中过量的去垢剂 | 第99-100页 |
| ·结果和讨论 | 第100-107页 |
| ·用GC定量分析去垢剂的可行性分析 | 第100-101页 |
| ·用GC-FID方法检测溶液中去垢剂浓度 | 第101-103页 |
| ·用GC-MS方法检测溶液中去垢剂浓度 | 第103-105页 |
| ·膜蛋白样品超滤浓缩过程中去垢剂浓度变化 | 第105-107页 |
| ·总结及展望 | 第107-108页 |
| 参考文献 | 第108-109页 |
| 第六章 核磁共振方法研究膜蛋白结构和功能展望 | 第109-113页 |
| ·膜蛋白结构研究现状 | 第109-110页 |
| ·核磁共振方法研究膜蛋白的展望 | 第110-112页 |
| ·液体核磁共振在膜蛋白解析中的应用 | 第110页 |
| ·固体核磁共振在膜蛋白解析中的应用 | 第110-111页 |
| ·膜蛋白原位结构和功能研究 | 第111-112页 |
| 参考文献 | 第112-113页 |
| 附录 | 第113-119页 |
| 附录一 蛋白质表达纯化用到的培养基及缓冲液配方 | 第113-114页 |
| 附录二 二维NCOCA固体核磁脉冲序列 | 第114-116页 |
| 附录三 MPD-Ubiquitin的三维谱的详细采样参数 | 第116-117页 |
| 附录四 Ubiquitin微晶主链原子化学位移归属表 | 第117-119页 |
| 致谢 | 第119-120页 |
| 在读期间发表的学术论文与取得的研究成果 | 第120-121页 |
