| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-9页 |
| 1 绪论 | 第9-16页 |
| ·生物信息学在基因鉴定方面的应用 | 第9页 |
| ·植物开花诱导概述 | 第9-12页 |
| ·光周期途径(Photoperiod pathway) | 第10页 |
| ·自主途径(Autonomous pathway) | 第10页 |
| ·春化途径(Vernalization) | 第10-11页 |
| ·赤霉素途径(Gibberellins,GA) | 第11页 |
| ·开花途径整合 | 第11-12页 |
| ·MADS-box概述 | 第12页 |
| ·MADS-box的起源和进化 | 第12页 |
| ·植物MADS-box的基因结构 | 第12页 |
| ·杨树花特点及其花发育基因调控 | 第12-13页 |
| ·杨树花的特点 | 第12-13页 |
| ·杨树花诱导基因工程 | 第13页 |
| ·RNAi技术 | 第13-14页 |
| ·Gateway技术在构建RNAi载体方面的应用 | 第14页 |
| ·研究内容、目的和意义 | 第14-16页 |
| 2 杨树基因组中FLC基因家族的生物信息学分析 | 第16-22页 |
| ·材料 | 第16页 |
| ·方法 | 第16-17页 |
| ·杨树PtrFLCs基因的鉴定和染色体定位 | 第16页 |
| ·蛋白质序列组中保守模体(motif)的识别 | 第16页 |
| ·系统发生树的构建和差异表达分析 | 第16-17页 |
| ·结果 | 第17-21页 |
| ·杨树PtrFLCs基因家族的鉴定 | 第17页 |
| ·杨树PtrFLCs基因的结构分析 | 第17-19页 |
| ·PtrFLCs蛋白的理化性质 | 第19页 |
| ·染色体定位 | 第19-20页 |
| ·杨树组织中PtrFLCs基因表达分析 | 第20-21页 |
| ·本章小结 | 第21-22页 |
| 3 小黑杨FLC基因的克隆和表达分析 | 第22-28页 |
| ·小黑杨FLC基因的克隆 | 第22-25页 |
| ·材料 | 第22页 |
| ·克隆载体和菌株 | 第22页 |
| ·培养基 | 第22页 |
| ·试剂和药品 | 第22页 |
| ·实验方法 | 第22-24页 |
| ·结果 | 第24-25页 |
| ·PnFLC1基因在小黑杨各组织中的表达分析 | 第25-27页 |
| ·材料及生长环境 | 第25页 |
| ·试剂 | 第25页 |
| ·实验方法 | 第25-26页 |
| ·结果和分析 | 第26-27页 |
| ·本章小结 | 第27-28页 |
| 4 拟南芥突变体flc的鉴定 | 第28-31页 |
| ·材料 | 第28页 |
| ·试剂和药品 | 第28页 |
| ·方法 | 第28-29页 |
| ·引物设计及PCR体系 | 第28页 |
| ·主要试剂配制及DNA提取 | 第28-29页 |
| ·结果及分析 | 第29-30页 |
| ·本章小结 | 第30-31页 |
| 5 PnFLC1在E.coli中的表达、纯化与抗体制备 | 第31-36页 |
| ·实验材料 | 第31页 |
| ·菌株和质粒 | 第31页 |
| ·酶类及主要试剂 | 第31页 |
| ·实验方法 | 第31-33页 |
| ·PnFLC1基因的PCR扩增 | 第31页 |
| ·目的基因和载体的双酶切连接 | 第31-32页 |
| ·pET52b-PnFLC1转化宿主菌及鉴定 | 第32页 |
| ·PnFLC1基因在E.coli BL21中的诱导表达及纯化 | 第32-33页 |
| ·多克隆抗体的制备及抗体的检测 | 第33页 |
| ·结果 | 第33-35页 |
| ·pET52b-PnFLC1重组质粒的获得 | 第33-34页 |
| ·pET52b-PnFLC1融合蛋白的表达及纯化 | 第34-35页 |
| ·PnFLC1的特异抗体的检测 | 第35页 |
| ·本章小结 | 第35-36页 |
| 6 PnFLC1植物过表达载体和RNAi表达载体的构建 | 第36-42页 |
| ·PnFLC1植物过表达载体构建 | 第36-37页 |
| ·试剂和酶类 | 第36页 |
| ·质粒和菌种 | 第36页 |
| ·实验步骤 | 第36-37页 |
| ·RNAi表达载体构建 | 第37-39页 |
| ·试剂和载体 | 第37页 |
| ·实验步骤 | 第37-39页 |
| ·结果 | 第39-41页 |
| ·pROKⅡ-PnFLC1重组质粒的获得 | 第39页 |
| ·转化pROKⅡ-PnFLC1质粒的农杆菌单克隆的检测 | 第39-40页 |
| ·TOPO-FR重组质粒的获得 | 第40页 |
| ·LR反应后单克隆检测 | 第40-41页 |
| ·本章小结 | 第41-42页 |
| 结论 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-49页 |
| 附录 | 第49-54页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第54-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
