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H6N1亚型禽流感对哺乳动物的传播与致病机制研究

摘要第1-7页
Abstract第7-15页
第一章 前言第15-27页
   ·流感病毒的概况第15-20页
     ·流感病毒的结构和分类第15-16页
     ·流感病毒大流行第16-17页
     ·流感病毒感染的宿主范围第17-20页
   ·流感病毒的基因重配第20-23页
   ·流感病毒的致病性第23-26页
     ·血凝素第23-24页
     ·聚合酶蛋白第24-25页
     ·非结构蛋白第25-26页
   ·H6亚型流感病毒的现状第26-27页
第二章 野鸭源H6N1亚型禽流感病毒SJ275株遗传进化分析和生物学特性研究第27-53页
 实验一 野鸭源H6N1亚型禽流感病毒SJ275株遗传进化分析第27-40页
   ·材料与方法第27-30页
     ·毒株第27页
     ·菌种、鸡胚和小鼠第27页
     ·主要试剂、仪器第27页
     ·A/H6N1禽流感病毒全长引物的设计第27-28页
     ·目标片段的克隆与扩增第28-30页
     ·重组质粒的鉴定第30页
   ·结果第30-38页
     ·病毒DNAPCR扩增结果第30-31页
     ·H6N1亚型AIV全基因序列第31-37页
       ·PB2序列第31-32页
       ·PB1序列第32-33页
       ·PA序列第33-34页
       ·HA序列第34-35页
       ·NP序列第35-36页
       ·NA序列第36页
       ·M序列第36-37页
       ·NS序列第37页
     ·H6N1亚型AIV全基因进化树分析结果第37-38页
   ·讨论第38-40页
 实验二 野鸭源H6N1亚型禽流感病毒SJ275株对BALB/c小鼠的致病性研究第40-48页
   ·材料与方法第40-42页
     ·毒株第40页
     ·实验动物第40页
     ·主要试剂和仪器第40页
     ·病毒的纯化及富集第40页
     ·鸡胚半数感染量(EID50)测定第40-41页
     ·A/H6N1对BALB/c小鼠的致病性研究第41-42页
   ·结果第42-46页
     ·鸡胚半数感染量(EID50)第42页
     ·小鼠临床症状及体重变化情况第42-43页
     ·小鼠半数致死量(MLD50)第43页
     ·病毒在小鼠体内复制水平检测第43-44页
     ·小鼠血清HI抗体水平检测结果第44-45页
     ·小鼠各脏器病理学切片检测结果第45-46页
   ·讨论第46-48页
 实验三 野鸭源H6N1亚型禽流感病毒SJ275株对犬的致病性研究第48-53页
   ·材料与方法第48-49页
     ·毒株第48页
     ·实验动物第48页
     ·A/H6N1对犬的致病性研究第48-49页
   ·结果第49-52页
     ·接种组和非接种组体温变化情况第49页
     ·攻毒后肺脏病毒分布情况第49页
     ·攻毒后犬排毒情况评估第49-50页
     ·病理切片及免疫组化情况第50-51页
     ·抗体水平检测第51-52页
   ·讨论第52-53页
第三章 A/H6N1与A/H1N1在哺乳动物体内的重配及重配病毒的传播性研究第53-61页
   ·材料与方法第53-55页
     ·毒株第53页
     ·实验动物第53页
     ·主要试剂、仪器第53页
     ·A/H6N1与A/H1N1的特异鉴定引物的设计合成第53-54页
     ·重配病毒的获得第54-55页
     ·体外拯救相关的H6亚型的重配病毒第55页
     ·重配病毒的传播能力的评估第55页
   ·结果第55-59页
     ·A/H6N1与A/H1N1EID50的测定结果第55-56页
     ·A/H6N1与A/H1N1混合感染豚鼠病毒复制情况评估第56页
     ·鼻洗液噬斑纯化的鉴定结果第56-57页
     ·重配病毒的分离及鉴定结果第57-58页
     ·重配病毒传播特性的评估第58页
     ·抗体水平检测第58-59页
     ·4株H6亚型重配病毒受体结合特异性结果第59页
   ·讨论第59-61页
第四章 A/H6N1流感病毒致病性变异分子机制研究第61-91页
 实验一 A/H6N1流感病毒在小鼠肺内的适应性传代第61-68页
   ·材料与方法第61-62页
     ·毒株第61页
     ·实验动物第61页
     ·主要试剂和仪器第61页
     ·A/H6N1流感病毒变异株的获得第61页
     ·3株A/H6N1流感病毒变异株病毒的富集第61-62页
     ·3株A/H6N1流感病毒变异株EID50的测定第62页
     ·3株A/H6N1流感病毒变异株致病性研究第62页
   ·结果第62-67页
     ·鸡胚半数感染量(EID50)第62页
     ·小鼠半数死亡量(MLD50)第62-63页
     ·小鼠体重变化情况第63-64页
     ·病毒在小鼠体内复制水平检测第64-65页
     ·小鼠血清HI抗体水平检测结果第65-66页
     ·小鼠各脏器病理学切片检测结果第66-67页
   ·讨论第67-68页
 实验二 野鸭源A/H6N1亚型禽流感病毒SJ275株反向遗传操作系统的建立第68-78页
   ·材料与方法第68-73页
     ·毒株与质粒第68页
     ·菌种、细胞、鸡胚和小鼠第68-69页
     ·主要试剂第69页
     ·反向遗传引物的设计合成第69页
     ·转染质粒的构建第69-71页
     ·转染质粒的提取第71-72页
     ·转染质粒的鉴定第72页
     ·病毒的拯救第72页
     ·拯救病毒测序鉴定第72页
     ·拯救病毒鸡胚半数感染量(EID50)测定第72页
     ·rA/H6N1对BALB/c小鼠致病性实验第72-73页
   ·结果第73-77页
     ·A/H6N1亚型禽流感病毒RT-PCR扩增产物的鉴定结果第73-74页
     ·拯救病毒rA/H6N1测序鉴定结果第74页
     ·拯救病毒rA/H6N1EID50测定结果第74页
     ·拯救病毒rA/H6N1MLD50测定结果第74页
     ·rA/H6N1感染小鼠的发病率和死亡率第74-75页
     ·各组织病毒滴定结果第75-76页
     ·病理组织变化结果第76-77页
     ·小鼠血清HI抗体水平检测结果第77页
   ·讨论第77-78页
 实验三 A/H6N1流感病毒致病力变异分子机制研究第78-91页
   ·材料与方法第78-82页
     ·毒株第78页
     ·实验动物第78页
     ·主要试剂和仪器第78页
     ·3株A/H6N1流感病毒变异株相关氨基酸位点的初步筛选第78页
     ·变异株A/H6N1-P8M3毒力标记的筛选第78-80页
     ·变异株相关病毒的致病性研究第80页
     ·变异株相关病毒各脏器组织嗜性的滴定第80-81页
     ·病理学切片观察第81页
     ·HI抗体水平检测第81页
     ·7株A/H6N1亚型流感病毒复制动力学的测定第81-82页
   ·结果第82-89页
     ·3株A/H6N1流感病毒变异株的变异位点第82页
     ·拯救病毒测序鉴定结果第82页
     ·拯救病毒的EID50第82页
     ·拯救病毒的MLD50第82-83页
     ·感染小鼠死亡率第83-84页
     ·感染组小鼠的体重变化情况第84页
     ·组织嗜性情况第84-85页
     ·小鼠血清HI抗体水平检测结果第85-86页
     ·病理及免疫组化第86-89页
     ·7株A/H6N1亚型流感病毒复制动力学结果第89页
   ·讨论第89-91页
参考文献第91-101页
创新和特色第101-102页
结论第102-103页
致谢第103-105页
导师简介第105-106页
作者简介及在学期间所取得的科研成果第106-107页
导师评阅表第107页

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