| 摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-14页 |
| 前言 | 第14-18页 |
| 材料与方法 | 第18-32页 |
| 1.材料 | 第18-20页 |
| ·引物合成及序列测定 | 第18页 |
| ·菌株、细胞株和质粒 | 第18页 |
| ·细胞培养和转染试剂 | 第18页 |
| ·分子生物学工具酶 | 第18页 |
| ·常用分子生物学试剂盒 | 第18-19页 |
| ·免疫学常用试剂 | 第19页 |
| ·试剂及溶液的配置 | 第19-20页 |
| ·SDS-PAGE所需溶液 | 第19-20页 |
| ·Western blot所需试剂 | 第20页 |
| ·其他常规试剂均购自本院条件处，多为国产分析纯 | 第20页 |
| ·主要仪器设备 | 第20页 |
| 2.方法 | 第20-32页 |
| ·常规PCR反应、质粒构建和阳性克隆的鉴定 | 第20-21页 |
| ·质粒提取、酶切片断回收、PCR反应产物的回收 | 第21-22页 |
| ·目的基因的获取和慢病毒载体构建 | 第22-28页 |
| ·慢病毒的包装 | 第28-29页 |
| ·利用慢病毒建立细胞系 | 第29页 |
| ·细胞转染 | 第29页 |
| ·蛋白浓度的测定 | 第29-30页 |
| ·Western blot分析 | 第30页 |
| ·MTT实验 | 第30页 |
| ·平板克隆形成实验 | 第30-31页 |
| ·软琼脂集落形成实验 | 第31页 |
| ·流式细胞术检测细胞周期 | 第31页 |
| ·数据分析 | 第31-32页 |
| 第一部分 4E-BP1及其四突变体4E-BP1-4A对肿瘤生长的影响 | 第32-43页 |
| ·构建慢病毒载体的pCDH-4E-BP1和pCDH-4E-BP1-4A,并验证其在293T细胞中的表达 | 第33页 |
| ·4E-BP1、4E-BP1-4A表达对胃癌细胞HGC27生长的影响 | 第33-36页 |
| ·建立HGC27-4E-BP1和HGC27-4E-BP1-4A稳定细胞系 | 第33-34页 |
| ·过表达4E-BP1和4E-BP1-4A不同程度的抑制胃癌细胞HGC7生长 | 第34-36页 |
| ·利用慢病毒系统建立4E-BP1和4E-BP1-4A稳定表达的前列腺癌细胞系,并通过MTT检测其对前列腺癌细胞生长的影响 | 第36-40页 |
| ·建立LNCaP-4E-BP1和LNCaP-4E-BP1-4A稳定细胞系,并检测其对LNCaP细胞生长的影响 | 第36-38页 |
| ·建立C4-2-4E-BP1和C4-2-4E-BP1-4A稳定细胞系,并检测其对C4-2细胞生长的影响 | 第38-39页 |
| ·建立C4-2B-4E-BP1和C4-2B-4E-BP1-4A稳定细胞系,并检测其对C4-2B细胞生长的影响 | 第39-40页 |
| 讨论 | 第40-43页 |
| 第二部分 4E-BP1不同磷酸化位点对肿瘤细胞生长的影响 | 第43-52页 |
| ·构建慢病毒载体4E-BP1及其不同磷酸化位点突变体的质粒 | 第43-44页 |
| ·建立过表达4E-BP1及其各突变体的稳定表达的DU145细胞系,并通过MTT、软琼脂和流式细胞术检测它们对前列腺癌细胞DU145生长的影响 | 第44-49页 |
| ·建立过表达4E-BP1及其各突变体的稳定表达的DU145细胞系 | 第44-46页 |
| ·4E-BP1及其突变体对前列腺癌细胞DU145生物学特性的影响 | 第46-49页 |
| 讨论 | 第49-52页 |
| 第三部分 4E-BP1及其T46A、37/46A突变体随着代数增加对肿瘤细胞生长的抑制作用消失 | 第52-63页 |
| ·前列腺癌细胞DU145中4E-BP1及T46A和37/46A突变体随着代数增加对肿瘤细胞的生长的抑制作用消失 | 第52-55页 |
| ·4E-BP1及T46A和37/46A突变体随着代数增加对肿瘤细胞的生长的抑制作用消失的机制研究 | 第55-57页 |
| ·在肺癌细胞A549中4E-BP1及其46A、37/46A突变体随着代数增加对肿瘤细胞的生长的抑制作用消失 | 第57-61页 |
| 讨论 | 第61-63页 |
| 结论 | 第63-65页 |
| 参考文献 | 第65-71页 |
| 附录一 | 第71-72页 |
| 附录二 | 第72-73页 |
| 综述 | 第73-99页 |
| 参考文献 | 第83-99页 |
| 发表的论文 | 第99-110页 |
| 致谢 | 第110-111页 |
