| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 目录 | 第6-8页 |
| 第一部分 引言 | 第8-16页 |
| 一、 水通道蛋白的结构和组织分布 | 第8-10页 |
| （一） 水通道蛋白的结构 | 第8-10页 |
| （二） 水通道蛋白组织分布 | 第10页 |
| 二、 水通道 AQP4 的研究现状 | 第10-14页 |
| （一） 水通道 AQP4 的结构 | 第10-11页 |
| （二） 水通道 AQP4 在神经系统的功能 | 第11-12页 |
| （三） 水通道 AQP4 在呼吸系统的功能 | 第12页 |
| （四） 水通道 AQP4 在消化系统的功能 | 第12-13页 |
| （五） 水通道 AQP4 在泌尿系统的功能 | 第13页 |
| （六） 水通道 AQP4 与视觉、听觉 | 第13-14页 |
| 三、 AQP4 抑制剂高通量筛选原理和方法 | 第14-15页 |
| （一） AQP4 抑制剂研究现状 | 第14页 |
| （二） 荧光蛋白标记 | 第14-15页 |
| （三） 细胞膜水通透性测定原理 | 第15页 |
| 四、 本文主要研究内容和意义 | 第15-16页 |
| 第二部分 材料与方法 | 第16-27页 |
| 一、 实验材料 | 第16-17页 |
| （一） 主要生化和分子生物学试剂 | 第16页 |
| （二） 实验细胞 | 第16页 |
| （三） 主要实验仪器、耗材及数据分析软件 | 第16-17页 |
| 二、 实验方法 | 第17-27页 |
| （一） pcDNA3.1 /Zeocin-AQP4-M23 真核表达载体的构建 | 第17-19页 |
| （二） 细胞模型的建立 | 第19-20页 |
| （三） AQP4 的 RT-PCR 鉴定 | 第20-22页 |
| （四） 免疫印迹 | 第22-23页 |
| （五） AQP4 免疫荧光鉴定 | 第23-24页 |
| （六） 两种细胞系水通透性比较测定 | 第24页 |
| （七） 中药组分库的建立 | 第24页 |
| （八） AQP4 抑制剂的高通量筛选 | 第24页 |
| （九） 利用分析型高效液相色谱对活性组分的组成进行分析 | 第24-25页 |
| （十） 活性化合物的分离、纯化、结构鉴定与活性分析 | 第25-27页 |
| 第三部分 实验结果 | 第27-39页 |
| 一、 pcDNA3.1 /Zeocin-AQP4-M23 真核表达载体的构建 | 第27页 |
| 二、 细胞模型的建立和鉴定 | 第27-30页 |
| （一） AQP4 表达的 RT-PCR 检测 | 第27-28页 |
| （二） AQP4 表达的免疫印迹 | 第28页 |
| （三） 荧光检测 | 第28-29页 |
| （四） FRT-V163S-AQP4-M23、V79-V163S-AQP4-M23-mCherry 细胞系水通透性的比较 | 第29-30页 |
| 三、 AQP4 抑制剂的高通量筛选 | 第30-33页 |
| 四、 AQP4 抑制剂的分离纯化、结构鉴定与活性分析 | 第33-39页 |
| （一） 活性组份的高效液相分析与活性化合物的分离、纯化 | 第33-36页 |
| （二） 活性化合物结构鉴定 | 第36-38页 |
| （三） 化合物的化学活性分析 | 第38-39页 |
| 第四部分 讨论 | 第39-41页 |
| 一、 两种高通量筛选细胞模型 FRT-V163S-AQP4-M23 与V79-V163S-AQP4-M23-mCherry 的比较 | 第39页 |
| 二、 以 V79-V163S-AQP4-M23-mCherry 为模型的高通量筛选，以及抑制剂的分离纯化 | 第39-41页 |
| 第五部分 结论 | 第41-42页 |
| 参考文献 | 第42-49页 |
| 致谢 | 第49-50页 |
| 学期间公开发表论文及著作情况 | 第50页 |
