| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 符号说明 | 第7-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第8-19页 |
| ·杆状病毒简介 | 第8页 |
| ·杆状病毒的分类 | 第8-10页 |
| ·杆状病毒的感染周期 | 第10-14页 |
| ·杆状病毒对虫体的感染 | 第11-12页 |
| ·杆状病毒的离体复制 | 第12-14页 |
| ·病毒的侵入 | 第13页 |
| ·病毒复制的准备 | 第13页 |
| ·病毒DNA复制和BVs产生 | 第13-14页 |
| ·PDVs和包涵体的产生 | 第14页 |
| ·杆状病毒基因组 | 第14页 |
| ·杆状病毒表达载体系统 | 第14-17页 |
| ·杆状病毒表达载体的特点 | 第15-16页 |
| ·Bac-to-Bac操作系统 | 第16-17页 |
| ·AcMNPV p6.9基因背景知识简介 | 第17-18页 |
| ·本实验的研究目的和研究意义 | 第18-19页 |
| 第二章 AcMNPV p6.9基因的克隆,原核表达,蛋白纯化及抗体制备 | 第19-29页 |
| ·材料 | 第19-22页 |
| ·菌株和质粒 | 第19-20页 |
| ·酶及试剂 | 第20页 |
| ·培养基及电泳缓冲液 | 第20页 |
| ·SDS-PAGE电泳所需试剂 | 第20-21页 |
| ·SDS-PAGE电泳凝胶的灌制 | 第21页 |
| ·引物 | 第21-22页 |
| ·方法 | 第22-26页 |
| ·大肠杆菌中质粒的提取方法 | 第22页 |
| ·大肠杆菌中Bacmid的提取法 | 第22-23页 |
| ·试剂盒回收DNA片段 | 第23-24页 |
| ·CaCl_2法制备感受态细胞 | 第24页 |
| ·p6.9基因的克隆及重组表达载体的构建 | 第24页 |
| ·重组表达载体的诱导表达及其亲和层析纯化 | 第24-26页 |
| ·MBP-P6.9融合蛋白的诱导表达及菌液破碎 | 第24-25页 |
| ·SDS-PAGE | 第25页 |
| ·亲和层析法纯化MBP-P6.9融合蛋白 | 第25-26页 |
| ·P6.9蛋白的抗血清制备 | 第26页 |
| ·结果 | 第26-28页 |
| ·p6.9基因的克隆及重组表达载体的构建 | 第26-27页 |
| ·重组表达载体的诱导表达和纯化 | 第27-28页 |
| ·P6.9蛋白抗血清的制备 | 第28页 |
| ·讨论 | 第28-29页 |
| 第三章 p6.9基因的功能分析 | 第29-43页 |
| ·材料 | 第29-31页 |
| ·菌种与质粒 | 第29-30页 |
| ·试剂盒和化学试剂、抗生素 | 第30页 |
| ·培养基 | 第30-31页 |
| ·引物 | 第31页 |
| ·方法 | 第31-36页 |
| ·缺失p6.9的AcBacmid的构建 | 第31-32页 |
| ·线性同源片段的获得 | 第31-32页 |
| ·CaCl_2法制备BW25113感受态细胞 | 第32页 |
| ·AcBacmid p6.9基因的缺失和PCR检测 | 第32页 |
| ·缺失p6.9基因的AcMNPV重组病毒的回复拯救 | 第32-34页 |
| ·p69rep基因的克隆以及转座载体的构建 | 第32-33页 |
| ·转座及鉴定 | 第33-34页 |
| ·三种Bacmid对昆虫细胞的转染和感染 | 第34-35页 |
| ·转染 | 第34页 |
| ·TCID_(50)测定病毒感染力 | 第34-35页 |
| ·缺失p6.9基因的AcMNPV病毒包埋切片观察 | 第35-36页 |
| ·结果与分析 | 第36-42页 |
| ·缺失p69基因的AcBacmid的构建 | 第36-37页 |
| ·p6.9rep基因的克隆与转座载体的构建 | 第37-38页 |
| ·重组Bacmid的转座及鉴定 | 第38-39页 |
| ·重组Bacmid转染细胞分析 | 第39-41页 |
| ·杆状病毒对昆虫细胞系的转染 | 第39-40页 |
| ·感染 | 第40页 |
| ·重组病毒的生长曲线测定 | 第40-41页 |
| ·缺失突变病毒的电镜检测 | 第41-42页 |
| ·讨论 | 第42-43页 |
| 第四章 总结与讨论 | 第43-45页 |
| 1. 总结 | 第43页 |
| 2. 讨论 | 第43-45页 |
| 参考文献 | 第45-50页 |
| 致谢 | 第50-51页 |
