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发酵床中放线菌的分离鉴定及菌株8F3发酵条件的优化

摘要第1-10页
ABSTRACT第10-11页
论文使用的符号和缩写词(ABBREVIATIONS)第11-12页
第一章 文献综述第12-24页
 1 畜禽养殖对环境产生的影响第12-13页
 2 畜禽粪污的处理方法第13-15页
   ·物理法第13-14页
   ·化学法第14页
   ·生物法第14-15页
 3 发酵床简介第15-17页
   ·发酵床的组成以及制作工艺第15-16页
   ·发酵床的优势第16-17页
 4 微生物多样性的研究方法第17-20页
   ·传统的分离培养法和微生物纯培养第17-18页
   ·分子生物学方法第18-20页
     ·16S rDNA的应用第18-19页
     ·杂交技术第19页
     ·生物标志物方法第19-20页
       ·生物醌技术第19-20页
       ·磷脂脂肪酸分析第20页
 5 放线菌第20-21页
 6 变性凝胶梯度电泳(DGGE)第21-22页
   ·变性凝胶梯度电泳的原理第21-22页
   ·PCR-DGGE在微生物学研究中的应用第22页
 7 研究的目的和意义第22-24页
第二章 材料与方法第24-40页
 1 试验材料第24-29页
   ·发酵床组成材料以及DNA样品第24页
     ·发酵床组成材料第24页
     ·基因组DNA样品第24页
   ·主要仪器和设备第24-25页
   ·工具酶、主要试剂、培养基及试剂盒第25-26页
     ·工具酶及主要试剂第25页
     ·培养基第25-26页
     ·试剂盒第26页
   ·载体和菌株第26-27页
   ·常用试剂及其配制第27-29页
 2 试验方法第29-40页
   ·PCR-DGGE第29-35页
     ·微生物总基因组DNA的提取、纯化第29-30页
       ·微生物总基因组DNA的提取第29页
       ·微生物总基因组DNA的纯化第29-30页
     ·微生物总基因组DNA浓度测定和质量检测第30页
     ·PCR扩增第30-32页
       ·PCR扩增第30-31页
       ·PCR反应产物电泳检测第31页
       ·PCR产物的回收、纯化第31-32页
     ·PCR-DGGE分析第32-33页
       ·平行胶制备方法第32-33页
       ·染色及拍照第33页
     ·目的片段的回收、克隆、测序第33-35页
       ·目的片段的回收及扩增第33-34页
       ·载体连接第34页
       ·感受态细胞制各(CaCl_2法)第34页
       ·连接产物的转化第34-35页
       ·阳性克隆的PCR鉴定和测序第35页
       ·同源性比较及系统进化分析第35页
   ·放线菌的分离纯化及鉴定第35-38页
     ·样品的抑菌处理第35页
     ·中温放线菌的分离、纯化第35-36页
     ·中温放线菌的鉴定第36-37页
       ·中温放线菌的形态学观察第36-37页
       ·中温放线菌的生理生化鉴定第37页
     ·高温放线菌的分离、纯化第37-38页
   ·产蛋白酶菌株8F3的发酵条件的优化第38-40页
     ·种子培养液的制备第38页
     ·温度对菌株8F3产蛋白酶的影响第38页
     ·起始pH对菌株8F3产蛋白酶的影响第38-39页
     ·时间对菌株8F3产蛋白酶的影响第39页
     ·接种量对菌株8F3产蛋白酶的影响第39页
     ·装瓶量对菌株8F3产蛋白酶的影响第39-40页
第三章 结果与分析第40-52页
 1 微生物总基因组DNA的提取和质量检测第40页
 2 PCR反应产物的检测第40-41页
 3 DGGE图谱及系统进化分析第41-42页
   ·DGGE图谱第41-42页
   ·系统进化分析第42页
 4 样品的抑菌处理结果第42-43页
 5 中温放线菌的分离、鉴定结果第43-46页
   ·中温放线菌的分离结果第43页
   ·中温放线菌的菌落特征第43-46页
   ·中温放线菌的形态学鉴定结果第46页
   ·中温放线菌的生理生化鉴定第46页
 6 高温放线菌的分离纯化第46-49页
 7 菌株8F3发酵条件的优化第49-52页
   ·温度对菌株8F3产蛋白酶的影响第49页
   ·初始pH对菌株8F3产蛋白酶的影响第49-50页
   ·时间对菌株8F3产蛋白酶的影响第50页
   ·接种量对菌株8F3产蛋白酶的影响第50-51页
   ·装瓶量对菌株8F3产蛋白酶的影响第51-52页
第四章 讨论第52-56页
 1 微生物总基因组DNA的提取第52页
 2 降落PCR与巢式PCR第52-53页
 3 DGGE的优缺点及本试验操作时遇到问题的解决对策第53-54页
   ·DGGE的优缺点第53-54页
   ·本试验操作时遇到问题的解决对策第54页
 4 系统发育分析第54-55页
 5 高温培养时的注意事项第55-56页
第五章 小结第56-58页
 1 本研究获得的成果第56页
 2 下一步值得研究的工作第56-58页
参考文献第58-65页
致谢第65页

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