| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-11页 |
| 论文使用的符号和缩写词(ABBREVIATIONS) | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-24页 |
| 1 畜禽养殖对环境产生的影响 | 第12-13页 |
| 2 畜禽粪污的处理方法 | 第13-15页 |
| ·物理法 | 第13-14页 |
| ·化学法 | 第14页 |
| ·生物法 | 第14-15页 |
| 3 发酵床简介 | 第15-17页 |
| ·发酵床的组成以及制作工艺 | 第15-16页 |
| ·发酵床的优势 | 第16-17页 |
| 4 微生物多样性的研究方法 | 第17-20页 |
| ·传统的分离培养法和微生物纯培养 | 第17-18页 |
| ·分子生物学方法 | 第18-20页 |
| ·16S rDNA的应用 | 第18-19页 |
| ·杂交技术 | 第19页 |
| ·生物标志物方法 | 第19-20页 |
| ·生物醌技术 | 第19-20页 |
| ·磷脂脂肪酸分析 | 第20页 |
| 5 放线菌 | 第20-21页 |
| 6 变性凝胶梯度电泳(DGGE) | 第21-22页 |
| ·变性凝胶梯度电泳的原理 | 第21-22页 |
| ·PCR-DGGE在微生物学研究中的应用 | 第22页 |
| 7 研究的目的和意义 | 第22-24页 |
| 第二章 材料与方法 | 第24-40页 |
| 1 试验材料 | 第24-29页 |
| ·发酵床组成材料以及DNA样品 | 第24页 |
| ·发酵床组成材料 | 第24页 |
| ·基因组DNA样品 | 第24页 |
| ·主要仪器和设备 | 第24-25页 |
| ·工具酶、主要试剂、培养基及试剂盒 | 第25-26页 |
| ·工具酶及主要试剂 | 第25页 |
| ·培养基 | 第25-26页 |
| ·试剂盒 | 第26页 |
| ·载体和菌株 | 第26-27页 |
| ·常用试剂及其配制 | 第27-29页 |
| 2 试验方法 | 第29-40页 |
| ·PCR-DGGE | 第29-35页 |
| ·微生物总基因组DNA的提取、纯化 | 第29-30页 |
| ·微生物总基因组DNA的提取 | 第29页 |
| ·微生物总基因组DNA的纯化 | 第29-30页 |
| ·微生物总基因组DNA浓度测定和质量检测 | 第30页 |
| ·PCR扩增 | 第30-32页 |
| ·PCR扩增 | 第30-31页 |
| ·PCR反应产物电泳检测 | 第31页 |
| ·PCR产物的回收、纯化 | 第31-32页 |
| ·PCR-DGGE分析 | 第32-33页 |
| ·平行胶制备方法 | 第32-33页 |
| ·染色及拍照 | 第33页 |
| ·目的片段的回收、克隆、测序 | 第33-35页 |
| ·目的片段的回收及扩增 | 第33-34页 |
| ·载体连接 | 第34页 |
| ·感受态细胞制各(CaCl_2法) | 第34页 |
| ·连接产物的转化 | 第34-35页 |
| ·阳性克隆的PCR鉴定和测序 | 第35页 |
| ·同源性比较及系统进化分析 | 第35页 |
| ·放线菌的分离纯化及鉴定 | 第35-38页 |
| ·样品的抑菌处理 | 第35页 |
| ·中温放线菌的分离、纯化 | 第35-36页 |
| ·中温放线菌的鉴定 | 第36-37页 |
| ·中温放线菌的形态学观察 | 第36-37页 |
| ·中温放线菌的生理生化鉴定 | 第37页 |
| ·高温放线菌的分离、纯化 | 第37-38页 |
| ·产蛋白酶菌株8F3的发酵条件的优化 | 第38-40页 |
| ·种子培养液的制备 | 第38页 |
| ·温度对菌株8F3产蛋白酶的影响 | 第38页 |
| ·起始pH对菌株8F3产蛋白酶的影响 | 第38-39页 |
| ·时间对菌株8F3产蛋白酶的影响 | 第39页 |
| ·接种量对菌株8F3产蛋白酶的影响 | 第39页 |
| ·装瓶量对菌株8F3产蛋白酶的影响 | 第39-40页 |
| 第三章 结果与分析 | 第40-52页 |
| 1 微生物总基因组DNA的提取和质量检测 | 第40页 |
| 2 PCR反应产物的检测 | 第40-41页 |
| 3 DGGE图谱及系统进化分析 | 第41-42页 |
| ·DGGE图谱 | 第41-42页 |
| ·系统进化分析 | 第42页 |
| 4 样品的抑菌处理结果 | 第42-43页 |
| 5 中温放线菌的分离、鉴定结果 | 第43-46页 |
| ·中温放线菌的分离结果 | 第43页 |
| ·中温放线菌的菌落特征 | 第43-46页 |
| ·中温放线菌的形态学鉴定结果 | 第46页 |
| ·中温放线菌的生理生化鉴定 | 第46页 |
| 6 高温放线菌的分离纯化 | 第46-49页 |
| 7 菌株8F3发酵条件的优化 | 第49-52页 |
| ·温度对菌株8F3产蛋白酶的影响 | 第49页 |
| ·初始pH对菌株8F3产蛋白酶的影响 | 第49-50页 |
| ·时间对菌株8F3产蛋白酶的影响 | 第50页 |
| ·接种量对菌株8F3产蛋白酶的影响 | 第50-51页 |
| ·装瓶量对菌株8F3产蛋白酶的影响 | 第51-52页 |
| 第四章 讨论 | 第52-56页 |
| 1 微生物总基因组DNA的提取 | 第52页 |
| 2 降落PCR与巢式PCR | 第52-53页 |
| 3 DGGE的优缺点及本试验操作时遇到问题的解决对策 | 第53-54页 |
| ·DGGE的优缺点 | 第53-54页 |
| ·本试验操作时遇到问题的解决对策 | 第54页 |
| 4 系统发育分析 | 第54-55页 |
| 5 高温培养时的注意事项 | 第55-56页 |
| 第五章 小结 | 第56-58页 |
| 1 本研究获得的成果 | 第56页 |
| 2 下一步值得研究的工作 | 第56-58页 |
| 参考文献 | 第58-65页 |
| 致谢 | 第65页 |