| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 引言 | 第11-15页 |
| 1 实验设计方案 | 第15-20页 |
| ·实验目的和意义 | 第15页 |
| ·研究内容 | 第15-17页 |
| ·miR-31/miR-21 和 hMLH1、hMSH2 在肺癌细胞系中的基础表达分析 | 第15页 |
| ·miR-31/miR-21 潜在靶点筛选 | 第15页 |
| ·miR-31/miR-21 靶位点确认分析 | 第15-16页 |
| ·miR-31/miR-21 对 hMLH1、hMSH2 表达调控分析 | 第16页 |
| ·miR-31/miR-21 对肺癌细胞增殖及周期的影响 | 第16-17页 |
| ·技术路线 | 第17-18页 |
| ·实验方案 | 第18-20页 |
| ·人肺癌细胞和 HeLa 细胞的培养及转染 | 第18页 |
| ·细胞总 RNA 的提取及 qRT-PCR 分析 | 第18页 |
| ·基础表达的检测 | 第18页 |
| ·作用靶点分析 | 第18页 |
| ·miR-21、miR-31 对 MMR 核心蛋白的调控分析 | 第18页 |
| ·MTT 分析 | 第18-19页 |
| ·RTCA 分析 | 第19页 |
| ·细胞周期分析 | 第19页 |
| ·统计分析 | 第19-20页 |
| 2 实验材料与方法 | 第20-41页 |
| ·材料 | 第20-27页 |
| ·主要实验仪器 | 第20-21页 |
| ·主要耗材 | 第21页 |
| ·实验细胞株、大肠杆菌及载体 | 第21页 |
| ·主要试剂及配制 | 第21-27页 |
| ·实验方法 | 第27-41页 |
| ·细胞培养和传代 | 第27页 |
| ·细胞冻存 | 第27页 |
| ·细胞复苏 | 第27页 |
| ·miRNA 抑制剂和类似物的合成 | 第27-28页 |
| ·RNAs 的转染（96 孔板单孔） | 第28页 |
| ·总 RNA 的提取 | 第28-29页 |
| ·RNA 纯度的分析 | 第29页 |
| ·逆转录反应 | 第29-30页 |
| ·普通 PCR、实时定量 PCR 和定点突变 PCR | 第30-33页 |
| ·Western blot 技术相关蛋白表达情况 | 第33-35页 |
| ·MTT 检测细胞生长情况 | 第35页 |
| ·细胞实时分析系统检测肺癌细胞生长情况 | 第35页 |
| ·流式细胞术测定细胞周期 | 第35-36页 |
| ·质粒的构建 | 第36-39页 |
| ·双荧光素酶报告基因检测系统的操作 | 第39-40页 |
| ·统计方法 | 第40-41页 |
| 3 实验结果 | 第41-60页 |
| ·肺癌细胞中 miR-31 与 hMLH1、miR-21 与 hMSH2 的表达呈负相关 | 第41-43页 |
| ·MiR-31/miR-21 抑制剂下调成熟 miR-31/miR-21 的表达；miR-31/miR-21 类似物上调成熟miR-31/miR-21 的表达； | 第43-45页 |
| ·MiR-31 负调控 hMLH1 蛋白表达，但对其 mRNA 表达无显著影响 | 第45-47页 |
| ·MiR-21 负调控 hMSH2 蛋白的表达，但对其 mRNA 表达无显著影响 | 第47-49页 |
| ·靶点验证 | 第49-54页 |
| ·生物信息学法潜在作用靶点的预测 | 第49-50页 |
| ·pGL-3 载体的构建 | 第50-52页 |
| ·荧光素酶活性的分析 | 第52-54页 |
| ·MiR-31 对细胞周期以及增殖的影响 | 第54-55页 |
| ·MiR-31 对细胞周期的影响 | 第54页 |
| ·MiR-31 对细胞增殖的影响 | 第54-55页 |
| ·MiR-21 对细胞周期以及增殖的影响 | 第55-57页 |
| ·MiR-21 对细胞周期的影响 | 第55-56页 |
| ·MiR-21 对细胞增殖的影响 | 第56-57页 |
| ·MMR 核心蛋白表达下调后对肺癌细胞周期及增殖的影响 | 第57-60页 |
| ·hMLH1 表达下调对细胞周期及增殖的影响 | 第57-58页 |
| ·hMSH2 表达下调对细胞周期及增殖的影响 | 第58-60页 |
| 4 结论 | 第60-61页 |
| 5 讨论 | 第61-64页 |
| 参考文献 | 第64-69页 |
| 附录A 缩写表 | 第69-70页 |
| 附录B 综述 | 第70-81页 |
| 参考文献 | 第79-81页 |
| 在学研究成果 | 第81-82页 |
| 致谢 | 第82页 |
