| 摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-36页 |
| ·生物表面活性剂 | 第14-15页 |
| ·生物表面活性剂 | 第14页 |
| ·生物表面活性剂特性 | 第14-15页 |
| ·生物表面活性剂的应用 | 第15页 |
| ·微生物表面活性剂的种类及其生物来源 | 第15-21页 |
| ·脂肽和脂蛋白 | 第17页 |
| ·磷脂、脂肪酸、中性脂 | 第17-18页 |
| ·聚合表面活性剂 | 第18页 |
| ·微粒表面活性剂 | 第18-19页 |
| ·糖脂 | 第19-21页 |
| ·海藻糖脂 | 第19-20页 |
| ·鼠李糖脂 | 第20页 |
| ·槐糖脂 | 第20-21页 |
| ·槐糖脂简介 | 第21-34页 |
| ·槐糖脂的结构及其特性 | 第21-22页 |
| ·产槐糖脂的菌株 | 第22-23页 |
| ·槐糖脂的合成途径 | 第23-25页 |
| ·脂肪酸的羟基化 | 第24页 |
| ·葡萄糖基团的转移 | 第24-25页 |
| ·槐糖脂的乙酰化和内酯化 | 第25页 |
| ·培养基成分对槐糖脂合成的影响 | 第25-28页 |
| ·亲水性碳源对槐糖脂合成的影响 | 第26页 |
| ·亲脂性碳源对槐糖脂合成的影响 | 第26-27页 |
| ·培养基中其它成分对槐糖脂合成的影响 | 第27-28页 |
| ·槐糖脂的应用 | 第28-31页 |
| ·在石油工业中的应用 | 第28-29页 |
| ·在环境保护中的应用 | 第29-30页 |
| ·在化妆品和洗涤剂中的应用 | 第30页 |
| ·在医药中的应用 | 第30-31页 |
| ·产槐糖脂菌株的遗传操作体系 | 第31-32页 |
| ·槐糖脂研究进展及存在问题 | 第32-34页 |
| ·本文研究内容及目的意义 | 第34-36页 |
| 第二章 拟威克酵母利用中等链长烷烃所产槐糖脂的分析与鉴定 | 第36-60页 |
| 引言 | 第36页 |
| ·材料与方法 | 第36-40页 |
| ·菌株、培养基及培养条件 | 第36-37页 |
| ·主要试剂及仪器 | 第37页 |
| ·槐糖脂测定方法 | 第37-39页 |
| ·葡萄糖浓度的测定 | 第37-38页 |
| ·槐糖脂含量的测定 | 第38-39页 |
| ·槐糖脂甲酯化 | 第39页 |
| ·甲酯化所需试剂 | 第39页 |
| ·实验仪器 | 第39页 |
| ·槐糖脂甲酯化步骤 | 第39页 |
| ·HPLC-MS分析的时间程序 | 第39-40页 |
| ·GC-MS分析的时间程序 | 第40页 |
| ·结果与分析 | 第40-57页 |
| ·以正辛烷为底物发酵产槐糖脂的分析 | 第40-44页 |
| ·以正辛烷为底物发酵得到槐糖脂粗品的HPLC-MS分析 | 第40-42页 |
| ·以正辛烷为底物发酵得到槐糖脂粗品的GC-MS分析 | 第42-44页 |
| ·对HPLC-MS和GC-MS检测结果的综合分析 | 第44页 |
| ·以正癸烷为底物发酵产槐糖脂的分析 | 第44-47页 |
| ·以正癸烷为底物发酵得到槐糖脂粗品的HPLC-MS分析 | 第44-46页 |
| ·以正癸烷为底物发酵得到槐糖脂粗品甲酯化后GC-MS分析 | 第46-47页 |
| ·对HPLC-MS和GC-MS检测结果的综合分析 | 第47页 |
| ·以正十二烷为底物发酵产槐糖脂的分析 | 第47-51页 |
| ·以正十二烷为底物得到槐糖脂粗品的HPLC-MS分析 | 第48-49页 |
| ·以正十二烷为底物得到槐糖脂粗品甲酯化后GC-MS分析 | 第49-51页 |
| ·HPLC-MS和GC-MS结果的综合分析 | 第51页 |
| ·以正十四烷为底物发酵的槐糖脂的分析 | 第51-55页 |
| ·以正十四烷为底物得到槐糖脂粗品的HPLC-MS分析 | 第51-53页 |
| ·以正十四烷为底物得到槐糖脂粗品甲酯化后GC-MS分析 | 第53-54页 |
| ·GC-MS和HPLC-MS的综合分析 | 第54-55页 |
| ·以葡萄糖为底物 | 第55-57页 |
| ·以葡萄糖为底物得到槐糖脂粗品的HPLC-MS分析 | 第55页 |
| ·以葡萄糖为底物得到槐糖脂粗品甲酯化后GC-MS分析 | 第55-57页 |
| ·HPLC-MS和GC-MS的综合结果分析 | 第57页 |
| ·小结 | 第57-60页 |
| 第三章 与脂肪酸代谢和延长相关基因的转录差异分析 | 第60-76页 |
| 引言 | 第60页 |
| ·材料与方法 | 第60-66页 |
| ·菌株、引物及转录差异分析的基因 | 第61-62页 |
| ·培养基和培养方法 | 第62-63页 |
| ·常用缓冲液、试剂和设备 | 第63页 |
| ·标准曲线的制作 | 第63-65页 |
| ·模板的定量 | 第63-64页 |
| ·模板的稀释 | 第64页 |
| ·荧光定量PCR标准曲线的制作 | 第64-65页 |
| ·熔解曲线分析 | 第65页 |
| ·拟威克酵母总RNA的提取及cDNA的合成 | 第65-66页 |
| ·总RNA的提取 | 第65页 |
| ·cDNA的合成 | 第65-66页 |
| ·脂肪酸代谢相关基因的实时荧光定量PCR分析 | 第66页 |
| ·结果与分析 | 第66-73页 |
| ·总RNA提取质量 | 第66-67页 |
| ·反转录后PCR验证 | 第67-68页 |
| ·荧光定量PCR标准曲线的制作 | 第68页 |
| ·荧光定量PCR定量结果的有效性分析 | 第68-69页 |
| ·在正辛烷和正十四烷培养条件下各基因转录差异分析 | 第69-71页 |
| ·在正癸烷和正十二烷培养条件下各基因转录差异分析 | 第71-73页 |
| ·小结 | 第73-76页 |
| 第四章 脂肪酸合酶α亚基基因的敲除及敲除株合成槐糖脂的分析 | 第76-97页 |
| 前言 | 第76页 |
| ·材料与方法 | 第76-85页 |
| ·菌株和质粒 | 第76-77页 |
| ·培养基和培养方法 | 第77页 |
| ·试剂、工具酶与仪器 | 第77-78页 |
| ·酵母基因组DNA小量提取 | 第78页 |
| ·总RNA的提取及cDNA的合成 | 第78页 |
| ·简并引物设计与脂肪酸合酶α亚基基因片段克隆 | 第78-79页 |
| ·TAIL-PCR扩增基因5’端和3’端 | 第79-81页 |
| ·克隆、测序与序列分析 | 第81页 |
| ·尿嘧啶营养缺陷型菌株的获得 | 第81-82页 |
| ·ura3基因敲除盒的构建 | 第81页 |
| ·筛选方法 | 第81页 |
| ·引物及验证转化子的方法 | 第81-82页 |
| ·拟威克酵母的转化方法 | 第82页 |
| ·脂肪酸合酶α亚基基因营养缺陷型菌株的获得 | 第82-84页 |
| ·脂肪酸合酶α亚基基因敲除盒的构建 | 第83页 |
| ·筛选方法 | 第83页 |
| ·引物 | 第83-84页 |
| ·脂肪酸合酶α亚基基因敲除株与野生菌株发酵产槐糖脂的分析 | 第84-85页 |
| ·结果与分析 | 第85-95页 |
| ·脂肪酸合酶α亚基基因的扩增 | 第85-88页 |
| ·脂肪酸合酶α亚基基因的Frag 1片段的扩增 | 第85-86页 |
| ·扩增fas α亚基的Frag 2片段的扩增 | 第86-87页 |
| ·TAIL-PCR扩增fasα亚基基因的5’端和3’端序列 | 第87-88页 |
| ·ura3基因的敲除 | 第88-90页 |
| ·脂肪酸合酶α亚基基因的敲除 | 第90-91页 |
| ·敲除株所产槐糖脂的分析 | 第91-95页 |
| ·以十二烷烃为底物,△F敲除株所产槐糖脂的HPLC-MS分析 | 第92页 |
| ·以十二烷烃为底物,△F敲除株所产槐糖脂甲酯化后GC-MS分析 | 第92-95页 |
| ·△F敲除株所产槐糖脂粗品的综合分析 | 第95页 |
| ·小结 | 第95-97页 |
| 论文创新性结果和展望 | 第97-98页 |
| 参考文献 | 第98-110页 |
| 攻读学位期间发表和撰写的学位论文 | 第110-112页 |
| 致谢 | 第112-114页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第114页 |
