| 中文摘要 | 第1-16页 |
| 英文摘要 | 第16-20页 |
| 1 前言 | 第20-42页 |
| ·低温胁迫对植物的影响 | 第20-21页 |
| ·植物对低温的响应 | 第21-25页 |
| ·植物细胞膜系统组分的改变 | 第21-23页 |
| ·活性氧的产生和清除 | 第23-24页 |
| ·植物体内渗透调节物质的积累 | 第24-25页 |
| ·CBF 基因家族 | 第25-26页 |
| ·CBF 基因抗逆作用机制 | 第26-27页 |
| ·CBF 的转录调控 | 第27-28页 |
| ·CBF 基因的上游调控 | 第28-32页 |
| ·CBF 基因的下游调控 | 第32-34页 |
| ·其它植物中的CBF/DREB 转录因子 | 第34-37页 |
| ·不依赖于CBF 的低温信号转导通路 | 第37-40页 |
| ·ABA 依赖的低温信号转导 | 第37-38页 |
| ·ESK1 低温应答途径 | 第38-39页 |
| ·ZAT12 低温应答途径 | 第39页 |
| ·H059、H0510 和H0515 途径 | 第39-40页 |
| ·RNA 修饰和核质转运在低温胁迫抗性中的重要作用 | 第40页 |
| ·本研究的目的、意义 | 第40-42页 |
| 2 材料与方法 | 第42-73页 |
| ·实验材料 | 第42-44页 |
| ·植物材料 | 第42页 |
| ·材料处理 | 第42页 |
| ·菌株与质粒 | 第42-43页 |
| ·酶及生化试剂 | 第43页 |
| ·PCR 引物 | 第43-44页 |
| ·实验方法 | 第44-73页 |
| ·总RNA 的提取 | 第44-45页 |
| ·cDNA 第一条链的合成 | 第45页 |
| ·cDNA 纯化（用于5’RACE） | 第45-46页 |
| ·对cDNA 进行末端加尾（用于5’RACE） | 第46页 |
| ·甜椒CBF3 基因全长的克隆 | 第46-49页 |
| ·中间片段的获得 | 第46-47页 |
| ·通过5’RACE 获得5’端序列 | 第47-48页 |
| ·通过3’RACE 获得3’端序列 | 第48页 |
| ·甜椒CBF3 基因全长的克隆 | 第48-49页 |
| ·Northern 杂交分析 | 第49-52页 |
| ·总RNA 的提取 | 第49页 |
| ·甲醛变性胶电泳 | 第49-50页 |
| ·转膜 | 第50-51页 |
| ·预杂交 | 第51页 |
| ·探针的制备 | 第51-52页 |
| ·杂交 | 第52页 |
| ·洗膜 | 第52页 |
| ·放射自显影 | 第52页 |
| ·真核表达载体的构建 | 第52-56页 |
| ·CfCBF3 表达载体的构建 | 第52页 |
| ·连接 | 第52-53页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第53页 |
| ·转化及克隆筛选 | 第53页 |
| ·碱法小量提取质粒DNA | 第53-54页 |
| ·质粒DNA 的酶切鉴定 | 第54页 |
| ·回收 | 第54-55页 |
| ·DNA 序列测定 | 第55页 |
| ·根癌农杆菌LBA4404 感受态细胞的制备与转化 | 第55页 |
| ·利用农杆菌介导转化烟草 | 第55-56页 |
| ·转基因烟草植株的PCR 检测 | 第56-58页 |
| ·CTAB 微量法提取基因组DNA | 第56-57页 |
| ·转基因植株的PCR 筛选 | 第57-58页 |
| ·甜椒CBF3 基因的原核表达及Western 杂交 | 第58-62页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第58页 |
| ·E.coli BL21 原核表达的诱导 | 第58页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE） | 第58-59页 |
| ·抗体的制备 | 第59页 |
| ·抗血清效价的测定（试管微量沉淀法） | 第59-60页 |
| ·Western 杂交 | 第60-62页 |
| ·转基因烟草生理指标的测定 | 第62-65页 |
| ·转基因植株叶片膜脂含量的测定方法 | 第62-63页 |
| ·叶绿素荧光参数测定 | 第63页 |
| ·叶片电导率的测定 | 第63页 |
| ·脯氨酸和可溶性糖含量的测定 | 第63-64页 |
| ·H202 与02 染色分析 | 第64页 |
| ·H202 和02 的测定 | 第64页 |
| ·低温处理植株生长量测定 | 第64页 |
| ·蛋白质含量的测定 | 第64-65页 |
| ·酵母双杂交 | 第65-73页 |
| ·试剂 | 第65页 |
| ·BD 载体的构建 | 第65-66页 |
| ·乙酸锂法制备并转化酵母感受态细胞 | 第66-67页 |
| ·酵母感受态细胞转化 | 第67页 |
| ·GAL4 DNA-BD 融和基因转录活性及毒性的验证 | 第67-68页 |
| ·RNA 提取及m RNA 的分离 | 第68页 |
| ·用Oligo（dT）引物合成cDNA 第一链 | 第68-69页 |
| ·用长距离PCR（LD-PCR）方法合成双链cDNA | 第69-70页 |
| ·用BD CHROMA SPIN? TE-400 柱子进行双链cDNA 的纯化 | 第70-71页 |
| ·cDNA 文库的建立 | 第71页 |
| ·酵母融合法筛选与诱饵蛋白互作的蛋白 | 第71-72页 |
| ·酵母质粒提取（玻璃珠法） | 第72-73页 |
| 3 结果与分析 | 第73-93页 |
| ·CfCBF3 基因的分离及其特征 | 第73-76页 |
| ·CfCBF3 基因全长的克隆 | 第73-74页 |
| ·CfCBF3 基因的序列分析 | 第74-76页 |
| ·基因编码蛋白的疏水性分析 | 第76页 |
| ·CfCBF3-GFP 融合蛋白的亚细胞定位 | 第76-77页 |
| ·355::CfCBF3-GFP 表达载体的构建 | 第76-77页 |
| ·CfCBF3-GFP 融合蛋白在洋葱表皮中的表达 | 第77页 |
| ·CfCBF3 基因在甜椒中的表达分析 | 第77-81页 |
| ·CfCBF3 基因在甜椒不同器官中的表达 | 第77-78页 |
| ·不同处理下CfCBF3 基因在甜椒中的表达 | 第78页 |
| ·CfCBF3 基因在大肠杆菌中的表达 | 第78-81页 |
| ·原核表达载体pET-CfCBF3 的构建 | 第78-79页 |
| ·SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第79-80页 |
| ·不同处理条件下CfCBF3 基因的在蛋白水平的表达分析 | 第80-81页 |
| ·CfCBF3 基因在烟草植株中的遗传转化 | 第81-84页 |
| ·真核表达载体的构建 | 第81-82页 |
| ·转CfCBF3 基因植株的鉴定 | 第82-84页 |
| ·CfCBF3 基因在烟草中的功能验证 | 第84-91页 |
| ·CfCBF3 提高了转基因烟草的抗胁迫能力 | 第84-85页 |
| ·CfCBF3 提高转基因烟草抗冷性的机理分析 | 第85-86页 |
| ·CfCBF3 基因过表达提高了烟草的抗低温能力 | 第86-91页 |
| ·CfCBF3 基因过表达对低温胁迫下H202 以及02 含量的影响 | 第86-87页 |
| ·CfCBF3 基因过表达改变膜脂脂肪酸不饱和度 | 第87-90页 |
| ·CfCBF3 的过量表达对低温胁迫下相对电导率的影响 | 第90-91页 |
| ·CfCBF3 基因过表达减轻低温胁迫下PSII 的光抑制 | 第91页 |
| ·与甜椒CBF3 基因互作蛋白的筛选 | 第91-93页 |
| 4 讨论 | 第93-97页 |
| ·CfCBF3 基因序列特征分析 | 第93页 |
| ·CfCBF3 下游基因的表达分析 | 第93-94页 |
| ·过量表达 CfCBF3 显著提高烟草的抗胁迫能力 | 第94页 |
| ·过量表达 CfCBF3 显著提高烟草的耐低温能力 | 第94-97页 |
| 5 结论 | 第97-98页 |
| 参考文献 | 第98-109页 |
| 致谢 | 第109-110页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第110页 |
