| 主要缩略词 | 第1-6页 |
| 中文摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 引言 | 第10-13页 |
| 2 实验材料 | 第13-17页 |
| ·实验试剂 | 第13-14页 |
| ·实验器材和用品 | 第14页 |
| ·实验试剂的配制 | 第14-17页 |
| 3 实验方法 | 第17-30页 |
| ·A2野生型及突变体的表达质粒构建 | 第17-22页 |
| ·片段克隆 | 第17-18页 |
| ·质粒构建 | 第18-19页 |
| ·质粒转化 | 第19页 |
| ·质粒扩增 | 第19页 |
| ·PCR鉴定 | 第19-20页 |
| ·质粒测序 | 第20页 |
| ·质粒抽提 | 第20页 |
| ·突变体基因的克隆构建 | 第20-22页 |
| ·原核系统IPTG诱导表达 | 第22页 |
| ·小量诱导表达 | 第22页 |
| ·大量诱导表达 | 第22页 |
| ·菌体的收集与超声破碎 | 第22-23页 |
| ·菌体收集 | 第22页 |
| ·超声破菌 | 第22-23页 |
| ·Ni-柱亲和层析 | 第23页 |
| ·凝胶过滤层析 | 第23-25页 |
| ·蛋白样品的制备 | 第23页 |
| ·Superdex10/300预装柱对目的蛋白进行凝胶过滤层析 | 第23-25页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺(SDS-PAGE)凝胶电泳分析 | 第25-26页 |
| ·胶的制备 | 第25页 |
| ·样品的处理和上样量的选择 | 第25-26页 |
| ·电泳 | 第26页 |
| ·染色、脱色和拍照 | 第26页 |
| ·结晶条件的筛选——悬滴气相扩散法 | 第26-27页 |
| ·结晶板准备 | 第26页 |
| ·蛋白样品准备 | 第26-27页 |
| ·悬滴法结晶筛选和优化 | 第27页 |
| ·X-射线晶体衍射、数据收集与处理 | 第27-28页 |
| ·晶体的低温冷冻与衍射 | 第27页 |
| ·X-射线衍射数据的收集和处理 | 第27页 |
| ·晶体结构的测定 | 第27-28页 |
| ·分子动力学模拟和体外酶切实验 | 第28-30页 |
| ·分子动力学模拟 | 第28-29页 |
| ·体外的ADAMTS-13酶切实验 | 第29-30页 |
| 4 技术路线图 | 第30-31页 |
| 5 实验结果 | 第31-41页 |
| ·突变体A2表达质粒的构建 | 第31页 |
| ·突变体A2蛋白原核表达的条件优化 | 第31-32页 |
| ·突变体A2蛋白纯化 | 第32-34页 |
| ·A2突变体的晶体筛选 | 第34-35页 |
| ·X射线晶体衍射、数据收集和晶体结构 | 第35-38页 |
| ·X射线晶体衍射、数据收集 | 第35-36页 |
| ·A2突变体的晶体结构 | 第36页 |
| ·A2突变体与野生型A2结构的比较 | 第36-37页 |
| ·金属离子的鉴定 | 第37-38页 |
| ·分子动力学模拟实验结果 | 第38-39页 |
| ·A2结构域的体外酶切实验 | 第39-41页 |
| 6 讨论 | 第41-45页 |
| 参考文献 | 第45-48页 |
| 致谢 | 第48-49页 |
| 已发表文章 | 第49-50页 |
| 附 综述 | 第50-57页 |
| 参考文献 | 第54-57页 |
| 附 已发表文章 | 第57-59页 |