| 第一部分 BCL10调控粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)转录水平的研究 | 第1-62页 |
| 摘要 | 第3-4页 |
| ABSTRACT | 第4-9页 |
| 1 前言 | 第9-21页 |
| ·GM-CSF基因及其启动子 | 第9-11页 |
| ·GM-CSF的结构及生物学作用 | 第9页 |
| ·GM-CSF的来源及调节因素 | 第9-10页 |
| ·GM-CSF基因及启动子 | 第10-11页 |
| ·B-cell lymphoma 10(BCL10) | 第11-16页 |
| ·BCL10的发现 | 第11-12页 |
| ·BCL10的功能 | 第12-16页 |
| ·BCL10能诱发细胞凋亡 | 第12-13页 |
| ·BCL10能激活NF-κB | 第13-14页 |
| ·BCL10能抑制细胞转化 | 第14-15页 |
| ·BCL10在免疫系统中的作用 | 第15页 |
| ·BCL10与肿瘤的关系 | 第15-16页 |
| ·NF-κB信号转导通路 | 第16-19页 |
| ·NF-κB信号转导系统的组成 | 第16-18页 |
| ·NF-κB/Rel家族 | 第16-17页 |
| ·NF-κB抑制蛋白(IκB)家族 | 第17页 |
| ·IκB激酶复合物(IKK) | 第17页 |
| ·IKK上游激酶 | 第17-18页 |
| ·NF-κB信号转导过程 | 第18页 |
| ·活化信号 | 第18页 |
| ·经典途径 | 第18页 |
| ·靶基因 | 第18页 |
| ·NF-κB信号通路与人类疾病的关系 | 第18-19页 |
| ·ETS蛋白 | 第19-21页 |
| ·ETS蛋白家族的分子结构 | 第19-20页 |
| ·ETS基因结构 | 第20-21页 |
| 2 项目的目的意义 | 第21-22页 |
| 3 材料与方法 | 第22-44页 |
| ·材料和试剂 | 第22页 |
| ·细胞,菌株和质粒 | 第22页 |
| ·试剂 | 第22页 |
| ·方法 | 第22-44页 |
| ·BCL10哺乳动物表达载体的构建 | 第22-28页 |
| ·细胞总RNA的提取 | 第22页 |
| ·引物的设计与合成 | 第22-23页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第23页 |
| ·聚合酶链式反应(PCR)扩增BCL10基因 | 第23页 |
| ·PCR产物的回收 | 第23-24页 |
| ·PCR产物的酶切 | 第24页 |
| ·哺乳动物表达载体pcDNA1酶切 | 第24页 |
| ·PCR片段的连接与转化 | 第24-27页 |
| ·DNA序列测定 | 第27-28页 |
| ·GM-CSF启动子/增强子的扩增及与luciferase报告基因嵌合载体的构建 | 第28-32页 |
| ·细胞DNA的提取 | 第28页 |
| ·引物的设计与合成 | 第28页 |
| ·聚合酶链式反应(PCR)扩增GM-CSF启动子和增强子序列 | 第28-29页 |
| ·PCR产物的回收 | 第29页 |
| ·PCR产物的酶切 | 第29页 |
| ·含luciferase报告基因表达载体pGL2的酶切 | 第29-30页 |
| ·GM-CSF启动子PCR片段的连接与转化 | 第30-31页 |
| ·DNA序列测定 | 第31页 |
| ·重组质粒pGL2-GMCSFpr的XhoⅠ和BglⅡ酶切 | 第31页 |
| ·GM-CSF增强子PCR片段的连接与转化 | 第31-32页 |
| ·DNA序列测定 | 第32页 |
| ·GM-CSF基础启动子luciferase嵌合载体的构建 | 第32-35页 |
| ·引物的设计与合成 | 第32-33页 |
| ·聚合酶链式反应(PCR)扩增GM-CSF-130到+1启动子序列 | 第33页 |
| ·PCR产物的回收 | 第33页 |
| ·PCR产物的酶切 | 第33-34页 |
| ·GM-CSF-130到+1启动子PCR片段的连接与转化 | 第34-35页 |
| ·DNA序列测定 | 第35页 |
| ·GM-CSF基础启动子突变体的构建 | 第35-38页 |
| ·引物的设计与合成 | 第35-36页 |
| ·聚合酶链式反应(PCR)扩增GM-CSF-130到+1突变体序列 | 第36页 |
| ·PCR产物的回收 | 第36页 |
| ·PCR产物的酶切 | 第36-37页 |
| ·突变体片段的连接与转化 | 第37-38页 |
| ·DNA序列测定 | 第38页 |
| ·质粒pcDNA1-BCL10,pGL2-GMCSFpr共同转染DG75、Jurkat和K562 | 第38-40页 |
| ·细胞培养、传代、冻存和复苏 | 第38页 |
| ·细胞转染 | 第38-39页 |
| ·荧光素酶(luciferase)检测 | 第39页 |
| ·按下表进行转染处理 | 第39-40页 |
| ·质粒pGLK2,pGL-Il-2,pGL2-GMCSFpr,pcDNA1-BCL10共同转染K562 | 第40页 |
| ·突变体与pcDNA1-BCL10共同转染K562细胞株 | 第40-41页 |
| ·pGL2-GMCSFpr-basic,pcDNA1-ETS1与pcDNA1-BCL10共同转染K562 | 第41页 |
| ·pGL2-GMCSFpr-basic,pcDNA1-Malt1与pcDNA1-BCL10共同转染K562 | 第41-42页 |
| ·半定量PCR检测内源GM-CSF mRNA的丰度 | 第42-44页 |
| ·细胞总RNA的提取 | 第42页 |
| ·引物的设计与合成 | 第42-43页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第43页 |
| ·模板量的确定 | 第43页 |
| ·指数增长期的确定 | 第43页 |
| ·半定量PCR检测细胞中GM-CSF | 第43-44页 |
| 4 结果与分析 | 第44-56页 |
| ·BCL10哺乳动物表达载体的构建 | 第44页 |
| ·GM-CSF启动子/增强子与luciferase报告基因嵌合载体的构建 | 第44-46页 |
| ·GM-CSF启动子与luciferase报告基因嵌合载体的构建 | 第44-45页 |
| ·GM-CSF启动子+增强子与luciferase报告基因嵌合载体的构建 | 第45-46页 |
| ·GM-CSF基础启动子luciferase嵌合载体的构建 | 第46-47页 |
| ·GM-CSF基础启动子突变体的构建 | 第47页 |
| ·K562细胞中,GM-CSF被BCL10激活,并经ionomycin处理后活性显著提高 | 第47-49页 |
| ·ETS1位点对于BCL10对GM-CSF的转录激活是必须的 | 第49-51页 |
| ·ETS1抑制BCL10对GM-CSF转录激活作用 | 第51-53页 |
| ·BCL10对GM-CSF的转录激活可能是通过一个独立于NF-κB途径进行的 | 第53-56页 |
| 5 讨论 | 第56-58页 |
| 6 结论 | 第58-59页 |
| 7 参考文献 | 第59-62页 |
| 第二部分 绿藻atx1基因铁调控元件的研究 | 第62-94页 |
| 摘要 | 第63-64页 |
| Abstract | 第64-66页 |
| 前言 | 第66-75页 |
| 材料和方法 | 第75-79页 |
| 结果 | 第79-88页 |
| 讨论 | 第88-90页 |
| 参考文献 | 第90-94页 |
| 致谢 | 第94-95页 |
| 附:在站期间发表论文 | 第95-96页 |
