| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 1 引言 | 第9-20页 |
| ·苏云金芽孢杆菌(Bt) | 第9-12页 |
| ·苏云金芽孢杆菌的研究历史 | 第9页 |
| ·杀虫晶体蛋白的结构与功能 | 第9-10页 |
| ·Bt毒蛋白的杀虫机理 | 第10页 |
| ·Bt毒蛋白基因的分类 | 第10-11页 |
| ·Bt杀虫晶体蛋白对昆虫的杀虫活性 | 第11-12页 |
| ·杨树Bt抗虫基因工程的研究现状 | 第12-13页 |
| ·植物基因工程表达载体 | 第13-16页 |
| ·启动子的选用和改造 | 第13-14页 |
| ·对基因编码区加以改造 | 第14页 |
| ·消除位置效应 | 第14页 |
| ·定位信号的应用 | 第14-15页 |
| ·多基因策略 | 第15页 |
| ·筛选标记基因的利用和删除 | 第15-16页 |
| ·获得多价转基因植物策略 | 第16-19页 |
| ·多基因和多个表达载体构建策略 | 第16-17页 |
| ·基因转化策略 | 第17-19页 |
| ·研究目的及意义 | 第19-20页 |
| 2 BtCry ⅠA基因的克隆 | 第20-27页 |
| ·材料和方法 | 第20-24页 |
| ·材料 | 第20-21页 |
| ·方法 | 第21-24页 |
| ·结果与分析 | 第24-27页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第24页 |
| ·PCR检测DNA | 第24-25页 |
| ·特异引物PCR扩增结果 | 第25页 |
| ·Bt1基因测序比对分析 | 第25-26页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第26-27页 |
| 3 pCAMBIA1305-Bt1表达载体的构建 | 第27-31页 |
| ·材料与方法 | 第27-29页 |
| ·材料 | 第27页 |
| ·方法 | 第27-29页 |
| ·结果与分析 | 第29-31页 |
| ·表达载体构建流程图 | 第29页 |
| ·重组载体的鉴定 | 第29-31页 |
| 4 BtCryⅢA基因的克隆 | 第31-35页 |
| ·材料和方法 | 第31-33页 |
| ·材料 | 第31页 |
| ·方法 | 第31-33页 |
| ·结果与分析 | 第33-35页 |
| ·质粒DNA的提取和PCR检测 | 第33页 |
| ·特异引物PCR扩增结果 | 第33-34页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第34页 |
| ·Bt3基因测序比对分析 | 第34-35页 |
| 5 pCAMBIA1305-Bt3表达载体的构建 | 第35-38页 |
| ·材料与方法 | 第35-36页 |
| ·材料 | 第35页 |
| ·方法 | 第35-36页 |
| ·结果与分析 | 第36-38页 |
| ·表达载体构建流程图 | 第36页 |
| ·重组载体的鉴定 | 第36-38页 |
| 6 pCAMBIA1305-Bt1-Bt3表达载体的构建 | 第38-43页 |
| ·材料与方法 | 第38-40页 |
| ·引物设计 | 第38页 |
| ·PCR扩增 | 第38-39页 |
| ·连接反应 | 第39页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备(CaCl_2法) | 第39页 |
| ·连接产物的转化、质粒提取和酶切鉴定 | 第39页 |
| ·表达载体的构建 | 第39-40页 |
| ·结果与分析 | 第40-43页 |
| ·特异引物PCR扩增结果 | 第40页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第40-41页 |
| ·表达载体构建流程图 | 第41页 |
| ·重组载体的鉴定 | 第41-43页 |
| 7 讨论 | 第43-46页 |
| ·融合双价基因植物双元表达载体构建中应该注意的问题 | 第43-44页 |
| ·引物设计 | 第43页 |
| ·PCR中应该注意的事项 | 第43-44页 |
| ·载体构建 | 第44页 |
| ·实验中意外的人为因素 | 第44页 |
| ·下一步要做的工作 | 第44-46页 |
| 8 结论 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-53页 |
| 附图A | 第53-54页 |
| 附图B | 第54-55页 |
| 附图C | 第55-56页 |
| 附录A pUCm-T载体的物理图谱 | 第56-57页 |
| 附录B pCAMBIA1305载体的物理图谱 | 第57-58页 |
| 附录C Bt1测序结果 | 第58-59页 |
| 附录D Bt3测序结果 | 第59-60页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第60-61页 |
| 作者简历 | 第61-62页 |
| 致谢 | 第62页 |