| 提要 | 第1-15页 |
| 第一章 本论文立论依据 | 第15-23页 |
| 第二章 含硒肽模拟谷胱甘肽过氧化物酶 | 第23-47页 |
| 第一节 序言 | 第23-24页 |
| 第二节 硒代半胱氨酸及其衍生物的合成 | 第24-30页 |
| 一、实验材料 | 第24-25页 |
| 1、药品和试剂 | 第24-25页 |
| 2、实验仪器 | 第25页 |
| 二、实验方法 | 第25-28页 |
| 1、β－氯－丙氨酸的合成 | 第25-26页 |
| 2、硒代胱氨酸(Selenocystine)的合成 | 第26-27页 |
| 3、H-Sec(PMB)-OH 的合成 | 第27页 |
| 4、Fmoc-Sec(PMB)-OH 的合成 | 第27-28页 |
| 5、Fmoc-Sec(PMB)-OH 的质谱分析 | 第28页 |
| 三、结果和讨论 | 第28-30页 |
| 1、Fmoc-Sec(PMB)-OH 的合成 | 第28-29页 |
| 2、Fmoc-Sec(PMB)-OH 的表征 | 第29-30页 |
| 第三节 具有 GPX 活性的硒肽的合成及性质研究 | 第30-42页 |
| 一、实验材料 | 第30-32页 |
| 1、药品和试剂 | 第30-31页 |
| 2、肽合成主要试剂的配制 | 第31-32页 |
| 3、实验仪器 | 第32页 |
| 二、实验方法 | 第32-35页 |
| 1、含硒肽合成 | 第32-33页 |
| 2、合成硒肽的表征 | 第33-34页 |
| 3、GPX活力测定 | 第34页 |
| 4、稳态动力学研究 | 第34-35页 |
| 5、最适温度和最适pH | 第35页 |
| 三、结果与讨论 | 第35-41页 |
| 1、硒肽的合成与纯化 | 第35-36页 |
| 2、硒肽的质谱分析 | 第36-37页 |
| 3、含硒多肽的硒含量检测 | 第37页 |
| 4、Se8P 的GPX 活力 | 第37页 |
| 5、Se8P的稳态动力学 | 第37-39页 |
| 6、Se8P 的最适pH 和最适温度 | 第39-41页 |
| 四、讨论 | 第41-42页 |
| 本章小节 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-47页 |
| 第三章 含硒肽诱导人黑素瘤 A375 细胞凋亡 | 第47-73页 |
| 第一节 序言 | 第47-48页 |
| 第二节 含硒多肽诱导黑素瘤细胞凋亡 | 第48-57页 |
| 一、实验材料 | 第48-49页 |
| 1、主要试剂 | 第48页 |
| 2、主要仪器 | 第48页 |
| 3、试剂配制 | 第48-49页 |
| 二、实验方法 | 第49-53页 |
| 1、细胞培养 | 第49-50页 |
| 2、细胞形态学观察 | 第50页 |
| 3、MTT 法测细胞存活率 | 第50-51页 |
| 4、细胞胞浆酶—乳酸脱氢酶(LDH)含量测定 | 第51-52页 |
| 5、二苯胺(DPA)法分析细胞内的DNA片段化 | 第52页 |
| 6、统计学分析 | 第52-53页 |
| 三、结果与讨论 | 第53-56页 |
| 1、细胞形态学分析 | 第53页 |
| 2、Se8P对人黑素瘤A375细胞的生长抑制 | 第53-54页 |
| 3、Se8P对A375细胞的毒性作用 | 第54-55页 |
| 4、A375细胞DNA片段化分析 | 第55-56页 |
| 四、讨论 | 第56-57页 |
| 第三节 含硒多肽诱导黑素瘤细胞凋亡的机制 | 第57-69页 |
| 一、实验材料 | 第57-58页 |
| 1、主要试剂 | 第57页 |
| 2、主要仪器 | 第57页 |
| 3、试剂配制 | 第57-58页 |
| 二、实验方法 | 第58-62页 |
| 1、细胞培养 | 第58-59页 |
| 2、A375 细胞内活性氧的荧光检测 | 第59页 |
| 3、A375细胞内活性氧的流式细胞仪检测 | 第59页 |
| 4、A375 细胞内线粒体跨膜电位的荧光检测 | 第59-60页 |
| 5、A375 细胞内线粒体跨膜电位流式细胞仪检测 | 第60页 |
| 6、细胞胞浆谷胱甘肽过氧化物酶活力检测 | 第60-61页 |
| 7、细胞内谷胱甘肽含量的检测 | 第61页 |
| 8、GSH，DTT和SOD对Se8P诱导A375细胞凋亡的影响 | 第61页 |
| 9、统计学分析 | 第61-62页 |
| 三、结果和讨论 | 第62-67页 |
| 1、Se8P 诱导细胞内活性氧(ROS)的产生 | 第62页 |
| 2、Se8P 诱导的细胞内活性氧(ROS)的流式细胞仪检测 | 第62-63页 |
| 3、Se8P诱导A375细胞内线粒体跨膜电位(△Ψm)变化的荧光检测 | 第63-64页 |
| 4、Se8P 诱导的细胞内线粒体跨膜电位的流式细胞仪检测 | 第64-65页 |
| 5、Se8P 引起A375 细胞内GPX 和GSH 的变化 | 第65-66页 |
| 6、GSH，DTT 和SOD 对Se8P 诱导A375 细胞凋亡的影响 | 第66-67页 |
| 四、讨论 | 第67-69页 |
| 本章小节 | 第69页 |
| 参考文献 | 第69-73页 |
| 第四章 具有SOD和GPX活力的双功能含硒多肽 | 第73-92页 |
| 第一节 序言 | 第73-74页 |
| 第二节 双功能酶的多肽前体的合成和表征 | 第74-80页 |
| 一、实验材料 | 第74-76页 |
| 1、药品和试剂 | 第74-75页 |
| 2、肽合成主要试剂的配制 | 第75-76页 |
| 3、实验仪器 | 第76页 |
| 二、实验方法 | 第76-78页 |
| 1、多肽合成 | 第76-77页 |
| 2、合成多肽的表征 | 第77-78页 |
| 三、结果与讨论 | 第78-80页 |
| 1、双功能酶多肽前体的构建 | 第78页 |
| 2、多肽的合成与纯化 | 第78页 |
| 3、多肽的 HPLC 分析 | 第78-79页 |
| 4、多肽的质谱分析 | 第79-80页 |
| 四、结论 | 第80页 |
| 第三节 双功能模拟物的制备和性质研究 | 第80-88页 |
| 一、实验材料 | 第80-81页 |
| 1、药品和试剂 | 第80页 |
| 2、实验仪器 | 第80-81页 |
| 二、实验方法 | 第81-83页 |
| 1、NaHSe的制备 | 第81页 |
| 2、含硒多肽的制备 | 第81页 |
| 3、含硒多肽与铜螯合 | 第81页 |
| 4、硒含量的测定 | 第81-82页 |
| 5、铜含量的测定 | 第82页 |
| 6、双功能多肽的 GPX 活力测定 | 第82页 |
| 7、双功能多肽的 SOD 活力测定 | 第82-83页 |
| 8、双功能多肽的GPX活力的稳态动力学研究 | 第83页 |
| 三、结果和讨论 | 第83-87页 |
| 1、双功能多肽的合成 | 第83-84页 |
| 2、Se-Cu-32P的表征 | 第84页 |
| 3、双功能多肽的GPX 活力和SOD 活力 | 第84-85页 |
| 4、双功能多肽 GPX 活力的稳态动力学 | 第85-87页 |
| 四、讨论 | 第87-88页 |
| 本章小节 | 第88-89页 |
| 参考文献 | 第89-92页 |
| 第五章 含硒多肽的抗氧化生物学效应研究 | 第92-109页 |
| 第一节 序言 | 第92-93页 |
| 第二节 GPX 模拟物的生物学效应 | 第93-98页 |
| 一、实验材料 | 第93-94页 |
| 1、主要试剂 | 第93页 |
| 2、主要仪器 | 第93页 |
| 3、试剂配制 | 第93-94页 |
| 二、实验方法 | 第94-95页 |
| 1、细胞培养 | 第94页 |
| 2、H_2O_2对vero细胞的损伤 | 第94页 |
| 3、MTT 法测细胞存活率 | 第94-95页 |
| 4、LDH 含量测定 | 第95页 |
| 5、统计学分析 | 第95页 |
| 三、结果与讨论 | 第95-98页 |
| 1、H_2O_2对vero细胞存活率的影响 | 第95-96页 |
| 2、GPX模拟物对H_2O_2 损伤的vero细胞的保护作用 | 第96-97页 |
| 3、GPX模拟物对H_2O_2泄漏vero细胞LDH的影响 | 第97-98页 |
| 第三节 双功能多肽的生物学效应 | 第98-104页 |
| 一、实验材料 | 第98-99页 |
| 1、主要试剂 | 第98-99页 |
| 2、主要仪器 | 第99页 |
| 3、试剂配制 | 第99页 |
| 二、实验方法 | 第99-101页 |
| 1、细胞培养 | 第99-100页 |
| 2、H_2O_2 对vero细胞的损伤 | 第100页 |
| 3、XOD/Xanthine/Fe~(2+)对vero细胞的损伤 | 第100页 |
| 4、MTT 法测细胞存活率 | 第100-101页 |
| 5、统计学分析 | 第101页 |
| 三、结果和讨论 | 第101-103页 |
| 1、双功能酶对H_2O_2 损伤的培养vero 细胞的保护作用 | 第101-102页 |
| 2、双功能酶对XOD/Xanthine/Fe~(2+)损伤的培养vero细胞的保护作用 | 第102-103页 |
| 四、讨论 | 第103-104页 |
| 本章小节 | 第104-105页 |
| 参考文献 | 第105-109页 |
| 作者简历 | 第109页 |
| 博士期间已发表和待发表的文章 | 第109-111页 |
| 致谢 | 第111-112页 |
| 中文摘要 | 第112-116页 |
| ABSTRACT | 第116-119页 |
