| 目录 | 第1-7页 |
| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-14页 |
| 缩略词(Abbreviation) | 第14-15页 |
| 第1章 文献综述 | 第15-49页 |
| ·猪传染性胸膜肺炎的概述 | 第15-27页 |
| ·病原学 | 第15-17页 |
| ·猪传染性胸膜肺炎的流行现状及危害 | 第17-19页 |
| ·猪传染性胸膜肺炎的发病机制 | 第19-20页 |
| ·猪传染性胸膜肺炎的临床症状和病理变化 | 第20-21页 |
| ·猪传染性胸膜肺炎的诊断 | 第21-25页 |
| ·猪传染性胸膜肺炎的防制 | 第25-27页 |
| ·胸膜肺炎放线杆菌毒力因子的研究进展 | 第27-35页 |
| ·荚膜(capsule,CP) | 第27-28页 |
| ·脂多糖(lipopolysaccharide,LPS) | 第28页 |
| ·外膜蛋白(outer membrane proteins,OMP) | 第28-29页 |
| ·转铁结合蛋白(transferrin binding proteins,Tbp) | 第29-30页 |
| ·酶类(enzymes) | 第30-31页 |
| ·粘附因子(adherence factor) | 第31-32页 |
| ·外毒素(RTX-toxins,Apx) | 第32-35页 |
| ·猪传染性胸膜肺炎疫苗的研究进展 | 第35-41页 |
| ·灭活苗 | 第35-36页 |
| ·亚单位苗 | 第36-37页 |
| ·ghosts疫苗 | 第37-38页 |
| ·口服疫苗 | 第38-39页 |
| ·弱毒活疫苗 | 第39-41页 |
| ·APP突变株构建方法的研究进展 | 第41-46页 |
| ·自然突变 | 第42页 |
| ·人工化学诱变 | 第42页 |
| ·分子生物学方法 | 第42-46页 |
| ·负向选择标记:细菌遗传学和病原学研究中的新工具 | 第46-49页 |
| ·负向选择标记在细菌遗传学和病原学研究的作用 | 第46页 |
| ·负向选择标记的种类 | 第46-48页 |
| ·负向选择标记的正负双向筛选系统的重组机制 | 第48-49页 |
| 第2章 研究的目的和意义 | 第49-51页 |
| 第3章 材料和方法 | 第51-68页 |
| ·试验材料 | 第51-56页 |
| ·菌株、质粒和培养条件 | 第51-53页 |
| ·酶、抗生素及试剂盒 | 第53页 |
| ·培养基及抗生素的配制 | 第53页 |
| ·主要溶液的配制 | 第53-55页 |
| ·引物 | 第55-56页 |
| ·试验方法 | 第56-68页 |
| ·细菌的增殖及胸膜肺炎放线杆菌基因组的提取 | 第56页 |
| ·PCR产物和酶切产物的回收与纯化 | 第56页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备(氯化钙法) | 第56页 |
| ·连接产物的转化 | 第56-57页 |
| ·质粒的制备 | 第57-58页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第58-59页 |
| ·SDS-PAGE蛋白凝胶电泳 | 第59页 |
| ·Western blot | 第59-60页 |
| ·胸膜肺炎放线杆菌的PCR鉴定 | 第60页 |
| ·胸膜肺炎放线杆菌SLW01株apxⅠC及apxⅡC基因前后臂片段的克隆与鉴定 | 第60-61页 |
| ·重组自杀性质粒pEMΔⅠC、pEMΔAⅡC的构建 | 第61-63页 |
| ·接合转移与胸膜肺炎放线杆菌双基因缺失株的构建 | 第63-65页 |
| ·缺失菌株生物学特性的研究 | 第65页 |
| ·缺失菌株对小鼠的毒力试验及LD_(50)的测定 | 第65-66页 |
| ·缺失菌株对小鼠的免疫保护试验 | 第66页 |
| ·血清的检测方法 | 第66-67页 |
| ·缺失菌株对断奶仔猪的安全性试验 | 第67页 |
| ·缺失菌株对断奶仔猪的免疫保护试验 | 第67页 |
| ·统计分析 | 第67-68页 |
| 第4章 结果与分析 | 第68-88页 |
| ·重组自杀性质粒pEMΔⅠC和pEMΔⅡC的构建 | 第68-74页 |
| ·重组自杀性质粒pEMΔⅠC的构建 | 第68-71页 |
| ·重组自杀性质粒pEMΔⅡC的构建 | 第71-74页 |
| ·缺失株的筛选和鉴定 | 第74-77页 |
| ·缺失株SLW02(ΔapxⅠC)的筛选和鉴定 | 第74-76页 |
| ·缺失株SLW03(ΔapxⅠC/ΔapxⅡC)的筛选和鉴定 | 第76-77页 |
| ·突变株生物学特性的研究 | 第77-79页 |
| ·Western blot检测突变株毒素的分泌 | 第77-78页 |
| ·突变株生长特性的研究 | 第78页 |
| ·溶血活性的检测 | 第78-79页 |
| ·缺失菌株对小鼠的毒力试验及LD_(50)的测定 | 第79-80页 |
| ·双缺失株SLW03对BALB/C小鼠的免疫效力试验 | 第80-82页 |
| ·双缺失株SLW03对Balb/C小鼠的保护试验 | 第80-81页 |
| ·免疫小鼠的血清检测结果 | 第81-82页 |
| ·双缺失株SLW03对断奶仔猪的安全性和免疫效力试验 | 第82-88页 |
| ·双缺失株SLW03对断奶仔猪的安全性试验 | 第82-83页 |
| ·双缺失株SLW03对断奶仔猪的保护试验 | 第83-86页 |
| ·免疫仔猪血清检测结果 | 第86-88页 |
| 第5章 讨论 | 第88-94页 |
| ·对亲本菌株的选择 | 第89页 |
| ·负向筛选系统的选择 | 第89-91页 |
| ·重组自杀性质粒的构建 | 第91页 |
| ·双基因缺失株的筛选鉴定 | 第91-92页 |
| ·双基因缺失株的毒力 | 第92页 |
| ·双基因缺失株的免疫保护性试验 | 第92-94页 |
| 第6章 结论 | 第94-112页 |
| 附录 | 第112-114页 |
| 致谢 | 第114页 |
