| 中文摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 第一章 引言 | 第10-22页 |
| 1 植物抗冻基因 | 第10-18页 |
| ·抗寒基因的分类 | 第10-13页 |
| ·编码酶类基因 | 第10-12页 |
| ·编码膜质相关蛋白的基因 | 第12页 |
| ·编码信号转导或调节作用的蛋白因子的基因 | 第12页 |
| ·编码抗冻蛋白蛋白（AFPS）的基因 | 第12-13页 |
| ·植物抗冻基因研究方法 | 第13-18页 |
| ·双向电泳 | 第14页 |
| ·差异杂交 | 第14-15页 |
| ·CDNA-AFLP (CDNA-AMPLIFIED FRAGMENT LENGTH POLYMORPHISM) | 第15-17页 |
| ·基因芯片（CHIP） | 第17-18页 |
| 2 肌醇半乳糖苷合成酶(GOLS)基因的研究进展 | 第18-20页 |
| 3 沙冬青概述 | 第20页 |
| 4 本研究的立题依据、研究意义及实验目标 | 第20-22页 |
| 第二章 材料和方法 | 第22-47页 |
| 1 实验材料及试剂 | 第22-28页 |
| ·实验材料 | 第22页 |
| ·实验试剂及技术 | 第22-28页 |
| ·试剂配制 | 第22-25页 |
| ·实验技术 | 第25-28页 |
| 2 实验方法 | 第28-47页 |
| ·CDNA-AFLP 寻找冬季上调表达的TDFS | 第28-34页 |
| ·CDNA－AFLP 基本原理 | 第28-29页 |
| ·CDNA-AFLP 具体步骤 | 第29-34页 |
| ·CDNA 全长序列的获得及分析 | 第34-36页 |
| ·CDNA全长序列的获得 | 第34-36页 |
| ·保守结构域的预测 | 第36页 |
| ·基因功能预测 | 第36页 |
| ·基因组序列的获得 | 第36页 |
| ·不同诱导条件下AMGOLS基因的表达分析 | 第36-38页 |
| ·通过TAIL-PCR技术获得AMGOLS基因的启动子部分序列 | 第38-41页 |
| ·AMGOLS基因上游调控序列的转录因子结合位点分析 | 第41页 |
| ·AMGOLS 的原核表达研究 | 第41-43页 |
| ·PET-22B-AMGOLS 原核表达载体的构建 | 第41-42页 |
| ·AMGOLS蛋白诱导表达的SDS-PAGE 电泳检测 | 第42页 |
| ·表达AMGOLS蛋白的大肠杆菌的抗寒性分析 | 第42-43页 |
| ·AMGOLS基因在转基因拟南芥中的功能研究 | 第43-47页 |
| ·组成型表达的植物转化载体PCAMBIA2300-355-AMGOLS的构建 | 第43-44页 |
| ·拟南芥抽真空转化 | 第44页 |
| ·转AMGOLS基因拟南芥植株的抗生素筛选 | 第44-45页 |
| ·转AMGOLS基因拟南芥植株的PCR 分子鉴定 | 第45页 |
| ·转AMGOLS基因拟南芥植株的纯系筛选 | 第45页 |
| ·转AMGOLS基因的拟南芥纯系的表达分析 | 第45页 |
| ·转AMGOLS基因的拟南芥纯系的表型分析 | 第45-47页 |
| 第三章 结果与分析 | 第47-56页 |
| 1 通过CDNA-AFLP 寻找到冬季上调表达的TDFS | 第47页 |
| 2 CDNA全长序列的获得、保守结构域的预测以及基因功能预测 | 第47-48页 |
| 3 AMGOLS 基因的基因组全序列的获得 | 第48-49页 |
| 4 不同诱导条件下AMGOLS基因的表达分析 | 第49-50页 |
| 5 AMGOLS 基因上游调控序列的获得及功能预测 | 第50-51页 |
| 6 AMGOLS 基因的原核表达 | 第51-53页 |
| ·PET-22B-AMGOLS 原核表达载体的PCR 检测 | 第51页 |
| ·AMGOLS基因在大肠杆菌中正确表达 | 第51页 |
| ·AMGOLS基因的表达提高了转基因大肠杆菌的抗寒性 | 第51-53页 |
| 7 AMGOLS 基因在拟南芥中的表达提高了转基因拟南芥的抗寒性 | 第53-56页 |
| ·获得纯合的转AMGOLS 基因的拟南芥 | 第53-54页 |
| ·转AMGOLS基因的拟南芥的抗生素筛选及PCR 分子鉴定 | 第53-54页 |
| ·AMGOLS基因在拟南芥中表达 | 第54页 |
| ·转AMGOLS基因的拟南芥纯系的获得 | 第54页 |
| ·AMGOLS基因的表达增强了拟南芥的抗冻性 | 第54-56页 |
| 第四章 讨论 | 第56-61页 |
| 1 沙冬青中抗冻基因的获得 | 第56页 |
| 2 肌醇半乳糖苷合成酶基因在沙冬青中的表达分析 | 第56-57页 |
| 3 沙冬青中肌醇半乳糖苷合成酶基因上游调控序列分析 | 第57-58页 |
| 4 AMGOLS 基因转化大肠杆菌以及拟南芥提高其抗冻性 | 第58-59页 |
| 5 沙冬青中肌醇半乳糖苷合成酶基因在抗冻作用中的功能分析 | 第59-61页 |
| 结论 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 附录 | 第68页 |
