新型β-琼胶酶AgaB的定向进化
| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-9页 |
| 前言 | 第9-25页 |
| 1 琼胶与琼胶酶 | 第9-17页 |
| ·琼胶 | 第9-10页 |
| ·琼胶酶 | 第10-11页 |
| ·琼胶酶的研究现状 | 第11-14页 |
| ·琼胶酶的应用 | 第14-17页 |
| 2 定向进化 | 第17-23页 |
| ·体外定向进化的一般过程和要求 | 第18-19页 |
| ·酶定向进化的策略 | 第19-23页 |
| 3 前期工作与工作展望 | 第23-25页 |
| 第一部分：突变体文库的构建 | 第25-36页 |
| 1 材料与仪器 | 第25-27页 |
| ·仪器 | 第25-26页 |
| ·菌株与质粒 | 第26页 |
| ·试剂 | 第26页 |
| ·常用缓冲液及溶液 | 第26-27页 |
| 2 试验方法 | 第27-32页 |
| ·pBS－ks（sv）载体的制备 | 第27-28页 |
| ·突变体文库的建立 | 第28-32页 |
| 3 实验结果 | 第32-36页 |
| ·pBS－ks（sv）载体结构 | 第32页 |
| ·易错PCR | 第32-33页 |
| ·化学诱变 | 第33-34页 |
| ·酶切、连接、转化步骤的条件优化 | 第34-35页 |
| ·讨论 | 第35-36页 |
| 第二部分：突变体文库的筛选 | 第36-47页 |
| 1 材料与仪器 | 第36-37页 |
| ·仪器 | 第36页 |
| ·菌株与质粒 | 第36页 |
| ·试剂 | 第36-37页 |
| ·常用缓冲液及溶液 | 第37页 |
| 2 试验方法 | 第37-40页 |
| ·水解圈法筛选 | 第37-38页 |
| ·DNS 法测定突变体发酵液上清酶活筛选 | 第38页 |
| ·在纯酶水平上筛选 | 第38-40页 |
| 3 结果 | 第40-47页 |
| ·不同酶量－水解圈关系图 | 第41页 |
| ·通过水解圈法筛选突变体文库 | 第41-42页 |
| ·通过 DNS 法测定突变体发酵液上清的酶活 | 第42-43页 |
| ·突变体酶的分离纯化 | 第43-45页 |
| ·纯酶的SDS－PAGE 检测 | 第45-46页 |
| ·纯酶水平酶活力及热稳定性的检测 | 第46页 |
| ·讨论 | 第46-47页 |
| 第三部分：突变体 M117 酶学性质的研究 | 第47-54页 |
| 1 材料与仪器 | 第47-48页 |
| ·仪器 | 第47页 |
| ·试剂 | 第47页 |
| ·常用缓冲液及溶液 | 第47-48页 |
| 2 试验方法 | 第48-49页 |
| ·序列测定及比对 | 第48页 |
| ·最适反应温度的测定 | 第48页 |
| ·最适反应pH 值的测定 | 第48页 |
| ·比活力的测定 | 第48页 |
| ·热稳定性的测定 | 第48页 |
| ·酶动力学参数的测定 | 第48页 |
| ·降解产物的鉴定 | 第48-49页 |
| 3 试验结果 | 第49-54页 |
| ·突变体M117 的序列比对 | 第49-50页 |
| ·突变体M117 的最适反应温度 | 第50页 |
| ·突变体M117 的最适反应pH | 第50-51页 |
| ·突变体M117 的比活力及热稳定性 | 第51页 |
| ·突变体M117 的动力学参数 | 第51-52页 |
| ·突变体M117 降解琼脂糖的产物分析 | 第52-53页 |
| ·讨论 | 第53-54页 |
| 总结与展望 | 第54-56页 |
| 参考文献 | 第56-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
| 攻读硕士期间撰写的文章 | 第63页 |
