| 中文摘要 | 第1-14页 |
| 英文摘要 | 第14-22页 |
| 前言 | 第22-24页 |
| 第一部分:酶辅助实时荧光定量PCR检测HBV共价闭合环状DNA方法的建立 | 第24-39页 |
| 一.材料与方法 | 第24-33页 |
| 1.试剂与材料、仪器 | 第24-26页 |
| ·试剂及配制 | 第24-26页 |
| ·材料 | 第26页 |
| 2.实验步骤 | 第26-33页 |
| ·HBVcccDNA标准品的制备 | 第26-29页 |
| ·pBHB4质粒的扩增 | 第26-27页 |
| ·pBHB4质粒DNA的提取与纯化 | 第27-29页 |
| ·HBVrcDNA标准品的制备 | 第29页 |
| ·HBVcccDNA引物的设计、合成与选择 | 第29-32页 |
| ·引物设计与合成 | 第29页 |
| ·引物的验证 | 第29-32页 |
| ·引物特异性验证 | 第29-32页 |
| ·引物灵敏度验证 | 第32页 |
| ·引物的选择 | 第32页 |
| ·HBVcccDNA实时荧光定量PCR检测方法(标准曲线)的建立 | 第32-33页 |
| 二.实验结果 | 第33-34页 |
| 三.讨论 | 第34-38页 |
| 四.结论 | 第38-39页 |
| 第二部分:HBV相关终末期肝病肝移植受体术后外周免疫细胞与骨髓CD34+细胞总HBVDNA及HBVcccDNA检测与临床意义分析 | 第39-64页 |
| 一.材料与方法 | 第40-46页 |
| 1.病例选择 | 第40页 |
| 2.试剂与材料、仪器 | 第40-42页 |
| ·试剂 | 第40-41页 |
| ·材料 | 第41页 |
| ·仪器 | 第41-42页 |
| 3.实验步骤 | 第42-46页 |
| ·外周血及骨髓标本的采集 | 第42页 |
| ·外周血免疫活性细胞的分离 | 第42-43页 |
| ·骨髓造血干、祖细胞的分离 | 第43-44页 |
| ·DNA提取 | 第44-45页 |
| ·细胞内总HBVDNA检测 | 第45页 |
| ·细胞内HBVcccDNA检测 | 第45-46页 |
| 4.统计方法 | 第46页 |
| 二.实验结果 | 第46-53页 |
| 1.常规检测结果 | 第46页 |
| 2.每20ml样品所获细胞数 | 第46页 |
| 3.血清HBV标志物及HBVDNA检测结果 | 第46页 |
| 4.细胞内总HBVDNA检测结果 | 第46-53页 |
| 三.讨论 | 第53-62页 |
| ·肝移植术后受体外周免疫细胞及骨髓CD_(34)~+细胞内HBVDNA存在的意义 | 第53-57页 |
| ·肝移植术后受体外周免疫细胞及骨髓CD_(34)~+细胞内HBV复制状态及其意义 | 第57-62页 |
| 四.结论 | 第62-64页 |
| 第三部分:利用HBV-Alu-PCR检测HBV相关肝病肝移植受体术后外周血单个核细胞与骨髓造血干祖细胞(CD_(34)~+)HBVX基因整合状态 | 第64-73页 |
| 一.材料与方法 | 第64-68页 |
| 1.病例选择 | 第64页 |
| 2.试剂与材料、仪器 | 第64-65页 |
| ·试剂 | 第65页 |
| ·材料 | 第65页 |
| ·仪器 | 第65页 |
| 3.实验步骤 | 第65-68页 |
| ·外周血及骨髓标本采集 | 第65页 |
| ·PBMC与骨髓CD_(34)~+细胞分离获取 | 第65页 |
| ·PBMC与骨髓CD_(34)~+细胞DNA提取 | 第65页 |
| ·HepG2.2.15肝癌细胞株DNA提取 | 第65页 |
| ·HBV-Alu-PCR原理 | 第65-67页 |
| ·HBV-Alu-PCR检测HBVX基因整合 | 第67-68页 |
| ·引物设计与合成 | 第67页 |
| ·HBV-Alu-PCR反应步骤及条件 | 第67-68页 |
| ·结果判定及测序 | 第68页 |
| ·终产物电泳 | 第68页 |
| ·测序 | 第68页 |
| 二.结果 | 第68-70页 |
| 三.讨论 | 第70-72页 |
| 四.结论 | 第72-73页 |
| 全文参考资料 | 第73-92页 |
| 综述:机体免疫系统功能与乙肝病毒负荷的关系 | 第92-133页 |
| 一.HBV感染对免疫系统的影响 | 第93-99页 |
| 1.HBV感染免疫细胞的机制与存在形式 | 第93页 |
| 2.HBV感染对免疫细胞功能的影响 | 第93-99页 |
| ·对T细胞的影响 | 第93-96页 |
| ·HBV对B细胞的影响 | 第96页 |
| ·HBV对抗原提呈细胞的影响 | 第96-97页 |
| ·HBV对其他免疫活性细胞的影响 | 第97页 |
| ·HBV对细胞因子及其他免疫相关因子的影响 | 第97-99页 |
| 二.机体免疫系统清除HBV的机制 | 第99-101页 |
| 1.溶细胞的HBV清除机制 | 第99-100页 |
| ·抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用(ADCC) | 第99页 |
| ·CTL作用 | 第99-100页 |
| 2.非溶细胞的HBV清除机制 | 第100-101页 |
| 三.HBV免疫逃逸机制 | 第101-106页 |
| 1.HBV因素 | 第102-104页 |
| ·HBV基因整合 | 第102页 |
| ·HBV复制与转录水平的减弱 | 第102-103页 |
| ·HBV基因变异 | 第103-104页 |
| ·HBV的肝外分布 | 第104页 |
| ·HBV所致免疫耗竭 | 第104页 |
| 2.机体因素 | 第104-106页 |
| ·免疫耐受 | 第104-105页 |
| ·遗传因素 | 第105-106页 |
| 四.HBV对治疗的反应 | 第106-111页 |
| 1.干扰素 | 第106页 |
| 2.核苷类似物 | 第106-107页 |
| 3.HBV疫苗 | 第107-108页 |
| 4.肝移植术后体内HBV变化 | 第108-111页 |
| 综述参考文献 | 第111-133页 |
| 致谢 | 第133页 |
