| 中文摘要 | 第1-5页 |
| 英文摘要 | 第5-6页 |
| 英文缩写词表 | 第6-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-21页 |
| 1.研究进展 | 第11-18页 |
| ·IGF的分子结构 | 第11-13页 |
| ·IGF的基因结构 | 第11-12页 |
| ·IGF的分子结构 | 第12-13页 |
| ·IGF-Ⅰ的空间结构 | 第13页 |
| ·IGF-Ⅰ的作用模式 | 第13页 |
| ·IGF的表达调控和生理功能 | 第13-18页 |
| ·IGF的表达调控 | 第13-14页 |
| ·IGF结合蛋白 | 第14-16页 |
| ·IGF受体 | 第16-17页 |
| ·IGF的生理功能 | 第17-18页 |
| 2 IGF的克隆和表达 | 第18-19页 |
| 3 实验目的、意义 | 第19-21页 |
| 第二章 鲤鱼类胰岛素生长因子-Ⅰ基因的克隆和序列分析 | 第21-34页 |
| 1 材料 | 第21-22页 |
| ·试验动物 | 第21页 |
| ·菌种和质粒 | 第21页 |
| ·试剂 | 第21页 |
| ·溶液配制 | 第21-22页 |
| ·主要仪器设备 | 第22页 |
| 2 方法 | 第22-27页 |
| ·新鲜鲤鱼肝脏的提取 | 第22-23页 |
| ·鲤鱼IGF-Ⅰ基因的RT-RCR扩增 | 第23-24页 |
| ·引物的设计与合成 | 第23页 |
| ·RT-PCR | 第23-24页 |
| ·类胰岛素生长因子-Ⅰ基因的克隆 | 第24-25页 |
| ·感受态大肠杆菌DH5α的制备 | 第24页 |
| ·目的DNA片段的回收 | 第24-25页 |
| ·连接转化 | 第25页 |
| ·鲤鱼IGF-Ⅰ基因的鉴定 | 第25-26页 |
| ·PCR鉴定 | 第25-26页 |
| ·酶切鉴定 | 第26页 |
| ·重组质粒的测序鉴定 | 第26页 |
| ·鲤鱼IGF-Ⅰ基因生物信息学分析 | 第26-27页 |
| ·鲤鱼IGF-Ⅰ基因序列比较分析 | 第26页 |
| ·鱼类IGF-Ⅰ核苷酸序列同源性比较与分析 | 第26-27页 |
| ·鲤鱼IGF-Ⅰ基因的核苷酸序列的翻译 | 第27页 |
| ·鲤鱼IGF-Ⅰ编码氨基酸序列比较 | 第27页 |
| ·IGF-Ⅰ蛋白质氨基酸序列亲水性、表面可能性和表面抗原性分析 | 第27页 |
| ·IGF-Ⅰ蛋白质的二级结构预测 | 第27页 |
| ·IGF-Ⅰ蛋白质的三级结构预测 | 第27页 |
| 3 结果 | 第27-31页 |
| ·IGF-Ⅰ的PCR鉴定 | 第27-28页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第28页 |
| ·重组质粒的测序鉴定 | 第28-29页 |
| ·IGF-Ⅰ基因生物信息学分析 | 第29-31页 |
| ·克隆的鲤鱼IGF-Ⅰ基因与其他鲤鱼IGF-Ⅰ序列比较分析结果 | 第29页 |
| ·IGF-Ⅰ核苷酸序列同源性比较与分析结果 | 第29页 |
| ·IGF-Ⅰ基因的核苷酸序列的翻译的氨基酸序列 | 第29-30页 |
| ·IGF-Ⅰ氨基酸序列比较结果 | 第30页 |
| ·IGF-Ⅰ蛋白质氨基酸序列的亲水性、表面可能性和表面抗原性分析结果 | 第30页 |
| ·二级结构预测结果 | 第30-31页 |
| ·三级结构预测结果 | 第31页 |
| 4 讨论 | 第31-34页 |
| ·关于纯的RNA的获得和RNA降解的防止 | 第31-32页 |
| ·关于cDNA序列的生物信息学分析方法 | 第32-33页 |
| ·关于扩增中出现差异的讨论 | 第33-34页 |
| 第三章 鲤鱼IGF-Ⅰ的原核表达及生物活性检测 | 第34-45页 |
| 1 材料 | 第34-36页 |
| ·菌株与质粒 | 第34页 |
| ·主要试剂 | 第34-35页 |
| ·实验所用溶液及其配制 | 第35-36页 |
| ·SDS-PAGE溶液的配制 | 第35页 |
| ·包涵体提取与洗涤所用溶液 | 第35-36页 |
| 2 方法 | 第36-40页 |
| ·pBV220-IGF-Ⅰ表达载体的构建 | 第36-38页 |
| ·质粒的提取 | 第36页 |
| ·成熟肽目的片段从pMD-IGF-Ⅰ质粒中的亚克隆与重组 | 第36-37页 |
| ·pBV220和pMD-simple-IGF-Ⅰ基因片段的连接反应 | 第37-38页 |
| ·原核表达质粒pBV220-IGF-Ⅰ转化表达菌DH5α | 第38页 |
| ·pBV220-IGF-Ⅰ双酶切鉴定 | 第38页 |
| ·大肠杆菌的表达诱导 | 第38-39页 |
| ·pBV220-IGF-Ⅰ表达鉴定 | 第39页 |
| ·pBV220-IGF-Ⅰ重组表达产物生物学活性的测定 | 第39-40页 |
| ·pBV220-IGF-Ⅰ融合表达蛋白的洗涤 | 第39页 |
| ·pBV220-IGF-Ⅰ蛋白含量的测定 | 第39页 |
| ·重组表达产物生物学活性测定 | 第39-40页 |
| 3 结果 | 第40-43页 |
| ·重组表达质粒pBV220-IGF-Ⅰ的构建与鉴定 | 第40页 |
| ·重组表达质粒的诱导表达 | 第40-41页 |
| ·重组表达质粒的诱导表达 | 第41-42页 |
| ·目的蛋白的表达量分析 | 第42页 |
| ·重组IGF-Ⅰ的生物学活性检测结果 | 第42-43页 |
| ·蛋白浓度的测定 | 第42页 |
| ·重组IGF-Ⅰ的生物学活性检测 | 第42-43页 |
| 4 讨论 | 第43-45页 |
| ·关于鲤鱼IGF-Ⅰ的诱导表达 | 第43页 |
| ·关于IGF-Ⅰ的活性检测 | 第43-45页 |
| 第四章 结论 | 第45-46页 |
| 致谢 | 第46-47页 |
| 附录 | 第47-57页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-62页 |
