英文缩写表 | 第1-6页 |
中文摘要 | 第6-7页 |
英文摘要 | 第7-8页 |
前言 | 第8-19页 |
第一部分 材料与方法 | 第19-45页 |
1 材料 | 第19-24页 |
·主要仪器设备 | 第19-20页 |
·菌种和细胞株 | 第20页 |
·试剂盒 | 第20-21页 |
·载体和工具酶 | 第21页 |
·其它常用试剂 | 第21页 |
·所需溶液和试剂的配方 | 第21-24页 |
2 实验方法 | 第24-45页 |
·人 KCTD10基因及其启动子的生物信息学分析 | 第24-25页 |
·人 KCTD10转录起始位点的确定 | 第25-30页 |
·人 KCTD10基因启动子的克隆及启动子各区段转录活性的确定 | 第30-37页 |
·Sp1和 AP-2α表达载体的构建及蛋白体外表达和纯化 | 第37-39页 |
·人KCTD10基因潜在转录调控因子的确定 | 第39-42页 |
·Sp1和 AP-2与启动子的结合活性及对转录活性的影响 | 第42-45页 |
第二部分 结果与分析 | 第45-59页 |
1 人 KCTD10基因及其启动子的生物信息学分析 | 第45-48页 |
·KCTD10基因结构分析 | 第45-47页 |
·人 KCTD10基因启动子的生物信息学分析 | 第47-48页 |
2 人 KCTD10基因转录起始位点的确定 | 第48-49页 |
3 人 KCTD10基本启动子序列的确定 | 第49-52页 |
·启动子克隆及缺失突变体的构建 | 第49-50页 |
·缺失突变体启动子荧光活性分析 | 第50-52页 |
4 位点特异突变及对启动子活性影响 | 第52-53页 |
5 Sp1和Ap-2α表达载体的构建及GST融合蛋白的体外表达 | 第53-54页 |
6 凝胶阻滞分析 Sp1和 AP-2与 KCTD10启动子位点特异性结合 | 第54-56页 |
7 Sp1和 AP-2在KCTD10基因调控的作用 | 第56-59页 |
·Sp1和 AP-2过表达的启动子荧光活性分析 | 第56-57页 |
·RT-PCR检测 Sp1和 AP-2对KCTD10表达的影响 | 第57-59页 |
第三部分 讨论 | 第59-64页 |
参考文献 | 第64-73页 |
致谢 | 第73-74页 |
附录Ⅰ | 第74-75页 |