| 第一章 文献综述 | 第1-38页 |
| 第一节 朊蛋白基因表达与动物传染性海绵状脑病的发生 | 第14-21页 |
| 1 传染性动物海绵状脑病及朊病毒学说 | 第14-15页 |
| 2 传染性海绵状脑病的致病机制 | 第15-19页 |
| 3 朊蛋白基因表达与动物传染性海绵状脑病的发生 | 第19-20页 |
| 4 展望 | 第20-21页 |
| 第二节 朊蛋白生物学与朊蛋白基因表达异常的生理效应 | 第21-25页 |
| 1 朊蛋白生物合成和转运 | 第21-22页 |
| 2 朊蛋白基因表达异常的生理效应 | 第22-24页 |
| 3 朊蛋白的翻译后修饰 | 第24页 |
| 4 朊蛋白的受体 | 第24页 |
| 5 展望 | 第24-25页 |
| 第三节 传染性海绵状脑病研究的实验模型 | 第25-30页 |
| 1 动物传染性海绵状脑病研究的动物模型 | 第25-27页 |
| 2 动物传染性海绵状脑病研究中的细胞模型 | 第27-29页 |
| 3 展望 | 第29-30页 |
| 第四节 实时荧光定量PCR技术及应用 | 第30-37页 |
| 1 基本原理 | 第30-33页 |
| 2 实时荧光定量PCR中几个重要的术语 | 第33-34页 |
| 3 定量方法 | 第34页 |
| 4 实时荧光定量PCR技术的应用 | 第34-36页 |
| 5 存在的问题及应用前景 | 第36-37页 |
| 前言 | 第37-38页 |
| 第二章：朊蛋白基因在金黄地鼠脑和外周组织的表达 | 第38-64页 |
| 前言 | 第38-39页 |
| 第一节 材料与方法 | 第39-51页 |
| 1 材料 | 第39-42页 |
| 2 方法 | 第42-50页 |
| ·利用TRIZOL试剂盒提取总RNA | 第42-43页 |
| ·总RNA的纯化 | 第43页 |
| ·cDNA的合成 | 第43-44页 |
| ·PCR产物的回收 | 第44页 |
| ·pGEM~(?)-T Easy载体的连接反应 | 第44-45页 |
| ·感受态细胞的制备、效价的测定及质粒DNA的转化 | 第45-46页 |
| ·重组质粒快速鉴定的Cracking法 | 第46页 |
| ·质粒DNA的少量制备 | 第46-47页 |
| ·测序反应 | 第47页 |
| ·荧光定量分析 | 第47-50页 |
| 3 统计学分析 | 第50-51页 |
| 第二节 朊蛋白基因表达标准品质粒和标准曲线的构建 | 第51-54页 |
| 1 结果与分析 | 第51-53页 |
| ·组织RNA提取和目的基因片断的扩增 | 第51页 |
| ·标准模板的鉴定 | 第51-52页 |
| ·标准模板的定量 | 第52页 |
| ·标准曲线的构建 | 第52-53页 |
| 2 讨论 | 第53-54页 |
| 第三节 金黄地鼠脑组织及外周器官朊蛋白基因表达的定量 | 第54-64页 |
| 1 动物及取材 | 第54页 |
| 2 样品基因表达的定量 | 第54-62页 |
| ·实时荧光定量PCR检测的动力学 | 第54-55页 |
| ·不同年龄各个组织mRNA表达的定量 | 第55-61页 |
| ·朊蛋白基因在正常金黄地鼠中枢和外周的表达模式 | 第61-62页 |
| 3 讨论 | 第62-64页 |
| ·关于实时荧光定量PCR绝对定量 | 第62页 |
| ·关于金黄地鼠年龄的选择 | 第62-63页 |
| ·关于朊蛋白基因在中枢神经系统、淋巴系统和外周组织的表达 | 第63-64页 |
| 第三章 处理重组朊蛋白接种金黄地鼠对朊蛋白基因表达的影响 | 第64-68页 |
| 前言 | 第64页 |
| 1 材料 | 第64-65页 |
| 2 方法 | 第65-66页 |
| ·重组朊蛋白的制备和处理 | 第65页 |
| ·朊蛋白基因表达的定量 | 第65页 |
| ·Western blotting分析 | 第65-66页 |
| 3 结果 | 第66-67页 |
| ·接种金黄地鼠的临床观察 | 第66页 |
| ·接种后朊蛋白基因每ng总RNA中朊蛋白基因mRNA的拷贝数 | 第66页 |
| ·Western blotting检测 | 第66-67页 |
| ·蛋白酶抗性蛋白的检测 | 第67页 |
| 4 讨论： | 第67-68页 |
| 第四章 大脑皮质神经元、星形胶质细胞和小脑颗粒神经元的体外培养和鉴定 | 第68-81页 |
| 前言 | 第68-69页 |
| 1 材料 | 第69-71页 |
| 2 方法 | 第71-74页 |
| ·神经元的体外分离和培养 | 第71-72页 |
| ·大脑皮质星形胶质细胞的体外分离和培养 | 第72页 |
| ·培养细胞的鉴定 | 第72-74页 |
| ·培养细胞的生长观测及活细胞计数 | 第74页 |
| 3 结果 | 第74-78页 |
| ·大脑皮质神经元的培养与鉴定 | 第74-75页 |
| ·小脑颗粒神经元的培养与鉴定 | 第75-77页 |
| ·大脑皮质星形胶质细胞培养与鉴定 | 第77-78页 |
| ·培养细胞生长密度、胞体短直径和活细胞计数 | 第78页 |
| 4 讨论 | 第78-81页 |
| ·关于培养细胞的取材 | 第79页 |
| ·培养神经元和星形胶质细胞的纯化 | 第79页 |
| ·神经元和星形胶质细胞培养时的消化时间和接种密度 | 第79-80页 |
| ·培养神经元和星形胶质细胞的鉴定 | 第80-81页 |
| 第五章 PrP106-126对培养神经细胞和星形胶质细胞朊蛋白基因表达的影响 | 第81-96页 |
| 前言 | 第81-82页 |
| 1 材料 | 第82-83页 |
| 2 方法 | 第83-86页 |
| ·神经细胞和星星胶质细胞的实验分组 | 第83页 |
| ·MTT比色法细胞存活分析 | 第83-84页 |
| ·分子生物学方法 | 第84页 |
| ·荧光定量分析 | 第84-85页 |
| ·统计学分析 | 第85-86页 |
| 3 结果 | 第86-93页 |
| ·相对定量标准曲线的制备 | 第86-89页 |
| ·培养细胞存活率的测定 | 第89-91页 |
| ·朊蛋白基因表达的相对定量 | 第91-93页 |
| 4 讨论 | 第93-96页 |
| ·关于相对定量 | 第93-94页 |
| ·朊蛋白基因表达在该神经源性细胞模型中的作用 | 第94-96页 |
| 结论 | 第96-97页 |
| 创新 | 第97-98页 |
| 参考文献 | 第98-110页 |
| 附录 | 第110-111页 |
| 个人简历 | 第111-113页 |
| 致谢 | 第113页 |
