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一个玉米AP2类转录因子基因的克隆和原核表达载体构建

摘要第1-6页
ABSTRACT第6-10页
1 文献综述第10-26页
   ·植物转录因子研究现状第10-17页
     ·植物转录因子的定义第10页
     ·植物转录因子的分类第10-12页
     ·转录因子的结构与功能第12-16页
     ·转录因子的活性第16-17页
   ·AP2/EREBP类转录因了的研究进展第17-26页
     ·AP2/EREBP类转录因子的起源与进化第18-19页
     ·AP2/EREBP类转录因子的DNA结合区第19-21页
     ·AP2/EREBP类转录因子的分类第21-22页
     ·AP2/EREBP类转录因子与目标DNA的结合第22-23页
     ·与植物发育有关的AP2/EREBP类转录因子第23-25页
     ·与植物胁迫应答有关的AP2/EREBP类转录因子第25-26页
2 立题依据第26页
3 材料与方法第26-35页
   ·材料玉米自交系A318中AP2类转录因子的克隆第26-31页
     ·植物材料的获得第26页
     ·分子生物学试剂第26页
     ·实验仪器第26页
     ·引物设计第26-27页
     ·实验方法第27-31页
   ·AP2类转录因子的生物信息学分析第31页
   ·原核表达载体的构建第31-34页
     ·ORF扩增引物设计第31-32页
     ·载体的制备第32-33页
     ·目的插入片段的制备第33页
     ·连接及转化第33页
     ·阳性克隆的鉴定第33-34页
   ·AP2基因实时荧光定量PCR检测第34-35页
     ·供试材料第34页
     ·仪器和试剂第34页
     ·荧光定量PCR引物设计第34页
     ·试验方法第34-35页
4 结果与分析第35-57页
   ·电子克隆方法克隆玉米AP2基因第35-36页
   ·RT-PCR验证克隆试验第36页
     ·自交系A318胚RNA的提取第36页
   ·克隆片段的序列分析第36-48页
     ·目的片段克隆第36-37页
     ·测序结果的分析第37-40页
     ·与相关转录因子的核苷酸和氨基酸序列比较第40-41页
     ·BT039300.1转录因子的功能域和二级结构预测第41-43页
     ·BT039300.1转录因子推导的氨基酸序列的疏水性/亲水性分析第43-44页
     ·BT039300.1跨膜结构预测第44页
     ·BT039300.1转录因子的卷曲螺旋和核定位信号预测分析第44-45页
     ·BT039300.1与AP2/EREBP类转录因子的进化树构建第45-46页
     ·BT039300.1编码的氨基酸的理化性质分析第46-47页
     ·BT039300.1转录因子的三级结构预测与分析第47-48页
   ·原核表达载体的构建第48-49页
   ·实时荧光定量PCR检测BT039300.1基因表达第49-57页
     ·RNA纯度和完整性分析第49-51页
     ·BT039300.1和GAPDH基因标准曲线的绘制第51-52页
     ·检测BT039300.1和GAPDH基因表达的准确性第52-53页
     ·cDNA模板梯度稀释扩增曲线第53-54页
     ·BT039300.1基因扩增的溶解曲线分析第54页
     ·BT039300.1基因表达的重复性检测第54-56页
     ·不同组织 BT039300.1基因的表达情况第56-57页
5 小结与讨论第57-62页
   ·电子克隆第57页
   ·玉米材料的获得第57-58页
   ·RNA的提取第58页
   ·BT039300.1基因的结构与功能预测第58-59页
   ·荧光定量PCR的选择使用第59-60页
   ·pET32a表达载体的选择与BT039300.1蛋白的展望第60-62页
参考文献第62-67页
致谢第67页

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