| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 1 文献综述 | 第10-25页 |
| 1．1 禽流感的研究进展 | 第10-13页 |
| 1．1．1 禽流感的发现 | 第10页 |
| 1．1．2 禽流感在我国的流行与危害 | 第10-12页 |
| 1．1．3 禽流感在世界的流行及其危害 | 第12-13页 |
| 1．2 禽流感的病原学 | 第13-15页 |
| 1．3 高流感病毒NS基因的研究进展 | 第15-16页 |
| 1．4 禽流感检测方法研究进展 | 第16-19页 |
| 1．4．1 病毒的分离鉴定 | 第16页 |
| 1．4．2 血凝(HA)和血凝抑制(HI)试验 | 第16-17页 |
| 1．4．3 琼脂凝胶扩散试验(AGID) | 第17页 |
| 1．4．4 神经氨酸酶抑制试验(NIT) | 第17页 |
| 1．4．5 病毒中和试验(NT) | 第17-18页 |
| 1．4．6 免疫荧光技术(IFT) | 第18页 |
| 1．4．7 酶联免疫吸附试验(ELISA) | 第18页 |
| 1．4．8 分子生物学诊断技术 | 第18-19页 |
| 1．5 禽流感的预防和控制 | 第19-20页 |
| 1．5．1 防止病毒的传入和散播 | 第19页 |
| 1．5．2 建立疫情的预警机制 | 第19页 |
| 1．5．3 封锁、隔离和消毒，消灭污染源 | 第19-20页 |
| 1．5．4 疫苗接种和检疫 | 第20页 |
| 1．6 禽流感的公共卫生意义 | 第20-21页 |
| 1．7 外源蛋白在大肠杆菌中的表达 | 第21-22页 |
| 1．8 原核表达产物的后处理 | 第22-25页 |
| 1．8．1 可溶性表达产物的处理 | 第22页 |
| 1．8．2 包涵体的复性和纯化 | 第22-25页 |
| 2 研究目的与意义 | 第25-26页 |
| 3 材料与方法 | 第26-37页 |
| 3．1 实验材料 | 第26-30页 |
| 3．1．1 病毒、质粒及菌株 | 第26-28页 |
| 3．1．2 酶及主要试剂 | 第28页 |
| 3．1．3 血清 | 第28页 |
| 3．1．4 主要试剂及溶液的配制 | 第28-30页 |
| 3．2 试验方法 | 第30-37页 |
| 3．2．1 病毒 RNA的提取 | 第30页 |
| 3．2．2 RT-PCR扩增 NS1基因 | 第30-31页 |
| 3．2．3 PCR产物的克隆 | 第31-32页 |
| 3．2．4 感受态细胞的制备(氯化钙法) | 第32页 |
| 3．2．5 连接产物及质粒的转化 | 第32页 |
| 3．2．6 质粒的制备 | 第32-33页 |
| 3．2．7 序列测定 | 第33页 |
| 3．2．8 DNA重组技术(DNA酶切、连接) | 第33-34页 |
| 3．2．9 重组质粒的酶切鉴定 | 第34页 |
| 3．2．10 大肠杆菌 BL21(DE3)的诱导表达 | 第34页 |
| 3．2．11 表达蛋白的鉴定 | 第34-35页 |
| 3．2．12 最佳包被浓度及血清最佳稀释倍数的确定(方阵滴定) | 第35-36页 |
| 3．2．13 ELISA方法的建立 | 第36页 |
| 3．2．14 ELISA阴阳性界限的确定 | 第36页 |
| 3．2．15 分析特异性试验 | 第36页 |
| 3．2．16 重复性试验 | 第36页 |
| 3．2．17 NS1-ELISA诊断特异性与敏感性检测 | 第36页 |
| 3．2．18 NS1-ELISA的临床应用 | 第36-37页 |
| 4 结果与分析 | 第37-48页 |
| 4．1 NS1基因的RT-PCR扩增结果 | 第37页 |
| 4．2 克隆质粒的酶切鉴定 | 第37页 |
| 4．3 序列测定与分析 | 第37-39页 |
| 4．4 NS1表达载体的构建与鉴定 | 第39页 |
| 4．5 NS1蛋白表达的检测 | 第39-41页 |
| 4．5．1 重组菌菌体裂解物的 SDS-PAGE电泳结果 | 第39-40页 |
| 4．5．2 蛋白质斑点杂交及 Western blot结果 | 第40-41页 |
| 4．6 NS1-ELISA的建立 | 第41-48页 |
| 4．6．1 空白菌裂解液在 NS1-ELISA中的最佳条件确定 | 第41-42页 |
| 4．6．2 抗原最佳包被量和血清稀释浓度的确定 | 第42页 |
| 4．6．3 NS1-ELISA阴阳界线的确定 | 第42-43页 |
| 4．6．4 NS1-ELISA重复性检测 | 第43-44页 |
| 4．6．5 NS1-ELISA分析特异性检测 | 第44页 |
| 4．6．6 NS1-ELISA诊断特异性与敏感性 | 第44-45页 |
| 4．6．7 动物实验血清检测结果 | 第45-47页 |
| 4．6．8 临床血清的 ELISA检测结果 | 第47-48页 |
| 5 讨论与结论 | 第48-54页 |
| 5．1 禽流感 | 第48页 |
| 5．2 禽流感病毒基因组 RNA提取与 NS1基因的克隆 | 第48-49页 |
| 5．3 非结构蛋白NS1基因原核表达载体的构建 | 第49页 |
| 5．4 非结构蛋白NS1的表达、提取与纯化 | 第49-51页 |
| 5．5 酶联免疫吸附试验(ELISA) | 第51-52页 |
| 5．5．1 试剂的选择 | 第51页 |
| 5．5．2 酶标板的选择 | 第51页 |
| 5．5．3 ELISA方法的判断标准 | 第51-52页 |
| 5．5．4 ELISA方法的优点和缺点 | 第52页 |
| 5．6 NS1-ELISA的应用与前景 | 第52-53页 |
| 5．7 禽流感的根除 | 第53页 |
| 5．8 小结 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-60页 |
| 缩略词(Abbreviation) | 第60-61页 |
| 附录 | 第61-62页 |
| 致谢 | 第62页 |
