| 中文摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-16页 |
| 论文缩写词表 | 第16-17页 |
| 第一章 绪论 | 第17-41页 |
| ·溶血栓药物的研究概况 | 第17-19页 |
| ·表达系统研究概况 | 第19-29页 |
| ·酵母和丝状真菌表达体系 | 第21-22页 |
| ·培养哺乳动物细胞生产重组蛋白 | 第22-24页 |
| ·E.coil表达体系 | 第24-29页 |
| ·利用E.coli生产重组蛋白 | 第29-36页 |
| ·包涵体的体外复性 | 第29-30页 |
| ·复性过程中的"瓶颈" | 第30-32页 |
| ·二硫键的形成 | 第32-34页 |
| ·包涵体蛋白的复性方法 | 第34-36页 |
| 参考文献 | 第36-41页 |
| 第二章 表达体系的选择与构建 | 第41-55页 |
| ·材料与仪器 | 第42-43页 |
| ·菌株及质粒 | 第42页 |
| ·试剂 | 第42-43页 |
| ·主要仪器 | 第43页 |
| ·培养基 | 第43页 |
| ·实验方法 | 第43-47页 |
| ·Escherichia coli工程菌的构建 | 第43-45页 |
| ·Pichia pastoris工程菌的构建 | 第45-46页 |
| ·免疫印迹(Western-Blot assay)鉴定 | 第46-47页 |
| ·结果 | 第47-52页 |
| ·E.coli工程菌的构建 | 第47-50页 |
| ·P.pastoris工程菌的构建 | 第50-52页 |
| ·讨论 | 第52-53页 |
| 小结 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-55页 |
| 第三章 发酵条件的优化和Reteplase包涵体的制备 | 第55-71页 |
| ·材料和仪器 | 第58-59页 |
| ·试剂 | 第58页 |
| ·仪器与设备 | 第58页 |
| ·菌株 | 第58页 |
| ·培养基 | 第58-59页 |
| ·实验方法 | 第59-60页 |
| ·摇瓶培养 | 第59页 |
| ·发酵罐培养 | 第59页 |
| ·包涵体洗涤 | 第59页 |
| ·包涵体的溶解 | 第59-60页 |
| ·超声波法辅助包涵体溶解 | 第60页 |
| ·其他检测方法 | 第60页 |
| ·结果 | 第60-64页 |
| ·IPTG浓度的影响 | 第60-61页 |
| ·诱导时间的确定 | 第61-62页 |
| ·葡萄糖浓度对目的蛋白表达量的影响 | 第62-63页 |
| ·诱导后提高培养温度 | 第63页 |
| ·包涵体的表达及洗涤 | 第63-64页 |
| ·包涵体溶解及超声波法辅助包涵体溶解 | 第64页 |
| ·讨论 | 第64-68页 |
| 小结 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-71页 |
| 第四章 Reteplase体外复性的研究 | 第71-100页 |
| ·材料与仪器 | 第74-76页 |
| ·试剂 | 第74-75页 |
| ·主要实验仪器 | 第75-76页 |
| ·实验方法 | 第76-78页 |
| ·稀释复性 | 第76页 |
| ·PDI辅助蛋白复性 | 第76页 |
| ·SEC辅助Reteplase蛋白复性 | 第76-77页 |
| ·ETI亲和层析纯化Reteplase | 第77页 |
| ·其他分析方法 | 第77-78页 |
| ·结果 | 第78-86页 |
| ·稀释复性 | 第78-79页 |
| ·PDI辅助蛋白复性 | 第79-80页 |
| ·色谱法辅助复性 | 第80-84页 |
| ·不同方法复性率的比较 | 第84-85页 |
| ·ETI亲和层析纯化Reteplase | 第85-86页 |
| ·讨论 | 第86-95页 |
| 小结 | 第95-96页 |
| 参考文献 | 第96-100页 |
| 总结与展望 | 第100-105页 |
| 致谢 | 第105-106页 |
| 在读期间发表论文情况 | 第106-107页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第107页 |