| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-16页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-26页 |
| ·前言 | 第16页 |
| ·CbrA-CbrB 双组分系统的发现 | 第16-17页 |
| ·CbrA 接受的环境信号 | 第17页 |
| ·CbrA-CbrB 调节多种氨基酸降解代谢的调控 | 第17-19页 |
| ·铜绿假单胞菌 CbrA-CbrB 在氨基酸降解代谢中的研究 | 第18页 |
| ·荧光假单胞菌 CbrA-CbrB 在组氨酸降解代谢中的研究 | 第18-19页 |
| ·CbrA-CbrB 与 NtrB-NtrC 的关系 | 第19页 |
| ·CbrA-CbrB 与 NtrB-NtrC 存在着调控上的偶联 | 第19页 |
| ·CbrB 和 NtrC 存在部分的功能重叠或冗余 | 第19页 |
| ·CbrB 是σ~(54)-依赖型的全局调节因子 | 第19-20页 |
| ·CbrA 调控菌体对抗生素的抗性 | 第20页 |
| ·CbrA-CbrB 参与胁迫应答、细菌群体运动、生物薄膜的形成等过程的调控 | 第20-21页 |
| ·CbrA-CbrB 双组分系统的作用机制 | 第21-23页 |
| ·Biolog 分析系统 | 第23页 |
| ·实时定量 PCR | 第23-24页 |
| ·立题依据和技术路线 | 第24-26页 |
| ·立题依据 | 第24-25页 |
| ·技术路线 | 第25-26页 |
| 第二章 突变株构建和功能互补 | 第26-41页 |
| ·材料 | 第26-29页 |
| ·菌株和质粒 | 第26-27页 |
| ·培养基及培养温度 | 第27-28页 |
| ·抗生素配制及工作浓度 | 第28页 |
| ·酶、试剂盒和化学试剂 | 第28页 |
| ·主要仪器 | 第28-29页 |
| ·常用缓冲液 | 第29页 |
| ·方法 | 第29-34页 |
| ·细菌基因组 DNA 的提取 | 第29页 |
| ·大肠杆菌质粒 DNA 的碱裂解法提取 | 第29-30页 |
| ·基因的 PCR 扩增 | 第30-31页 |
| ·DNA 片段的回收与纯化 | 第31-32页 |
| ·DNA 片段酶切及连接反应 | 第32-33页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备与转化 | 第33页 |
| ·三亲结合实验 | 第33-34页 |
| ·结果分析 | 第34-40页 |
| ·突变株的构建原理 | 第34页 |
| ·重组质粒载体的构建 | 第34-38页 |
| ·cbrA 突变株的筛选与验证 | 第38-39页 |
| ·cbrA 基因功能互补菌株的构建 | 第39-40页 |
| ·讨论 | 第40-41页 |
| 第三章 cbrA 突变株表型鉴定 | 第41-57页 |
| ·材料 | 第41-42页 |
| ·菌株 | 第41页 |
| ·培养基 | 第41-42页 |
| ·化学试剂和试剂盒 | 第42页 |
| ·主要仪器 | 第42页 |
| ·常用溶液 | 第42页 |
| ·方法 | 第42-48页 |
| ·P.stutzeri A1501 中 CbrA、CbrB 的进化与结构分析 | 第42页 |
| ·菌株验证 | 第42-43页 |
| ·生长曲线测定 | 第43页 |
| ·Biolog 分析野生型与突变株对碳源的利用情况 | 第43-44页 |
| ·趋化实验 | 第44页 |
| ·RNA 提取 | 第44-45页 |
| ·DNA 消化 | 第45页 |
| ·RNA 反转为 cDNA | 第45-46页 |
| ·实时荧光定量 PCR | 第46-48页 |
| ·结果分析 | 第48-55页 |
| ·P.stutzeri A1501 与已报道的含 CbrA、CbrB 蛋白的细菌进行进化树分析 | 第48-49页 |
| ·P.stutzeri A1501 中 CbrA、CbrB 的结构分析 | 第49-50页 |
| ·cbrA 突变株和野生型 A1501 生长曲线的测定 | 第50页 |
| ·Biolog 分析 cbrA 突变对碳代谢的影响 | 第50-51页 |
| ·cbrA 突变对氨基酸代谢的影响 | 第51-52页 |
| ·RNA 的提取 | 第52-53页 |
| ·正常条件下 cbrA 突变株中 crcZ 和 crc 的表达 | 第53-54页 |
| ·碳代谢相关基因表达差异 | 第54页 |
| ·cbrA 基因突变对趋化运动能力的影响 | 第54-55页 |
| ·讨论 | 第55-57页 |
| 第四章 cbrA 突变对氮代谢的影响 | 第57-65页 |
| ·材料 | 第57-58页 |
| ·菌株 | 第57页 |
| ·培养基、化学试剂、仪器 | 第57-58页 |
| ·方法 | 第58-60页 |
| ·菌株验证 | 第58页 |
| ·固氮酶活测定 | 第58-59页 |
| ·RNA 提取、DNA 消化及 RNA 反转录 | 第59页 |
| ·实时定量 | 第59页 |
| ·细菌反硝化能力的测定 | 第59-60页 |
| ·结果分析 | 第60-63页 |
| ·cbrA 突变对固氮酶活性的影响 | 第60页 |
| ·固氮条件下 RNA 的提取 | 第60-61页 |
| ·固氮相关基因表达差异分析 | 第61-62页 |
| ·cbrA 突变对细菌反硝化能力的影响 | 第62-63页 |
| ·讨论 | 第63-65页 |
| 第五章 全文结论 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
| 作者简历 | 第73页 |
