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工程菌酯酶B1的分离纯化及固定化研究

中文摘要第1-8页
Abstract第8-10页
缩写说明第10-11页
1 引言第11-26页
   ·农药残留及其危害第11-12页
   ·农药的酶促降解第12-13页
   ·酯酶第13-14页
     ·酯酶的理化性质第13-14页
     ·酯酶的提取与纯化第14页
   ·酯酶B1第14-16页
     ·蚊虫的抗药性第14-15页
     ·库蚊酯酶类型第15页
     ·酯酶B1 研究进展第15-16页
   ·酶的分离纯化第16-20页
     ·盐析第16-17页
     ·离子交换层析第17-18页
       ·原理第17页
       ·离子交换层析介质第17-18页
     ·凝胶过滤层析第18-20页
       ·原理第18-20页
       ·凝胶过滤层析所用介质第20页
   ·固定化酶第20-26页
     ·固定化酶的制备方法第21-23页
       ·载体结合法第21-22页
       ·交联法第22页
       ·包埋法第22-23页
     ·固定化酶的形状与性质第23-26页
       ·固定化酶的形状第23-24页
       ·固定化酶的性质第24-26页
   ·本研究的目的和意义第26页
2 材料与方法第26-37页
   ·材料第27-28页
     ·细菌与质粒第27页
     ·主要药品及试剂第27页
     ·主要仪器第27-28页
     ·试剂、培养基第28页
       ·主要试剂第28页
       ·培养基第28页
   ·实验方法第28-37页
     ·菌种保存第28页
     ·感受态细胞制备第28-29页
     ·细菌转化第29页
     ·培养条件第29页
     ·酶的活力第29页
       ·酶的活力测定第29页
       ·标准曲线的建立第29页
     ·蛋白质含量的测定第29-31页
       ·标准曲线的绘制第30-31页
     ·降解酶的提取第31页
     ·酶的分离纯化第31-35页
       ·硫酸铵分级盐析第31页
       ·DEAE-Sepharose CL-6B 阴离子交换柱层析第31页
       ·Sephadex G-150 分子筛层析第31页
       ·电泳分析第31-34页
       ·SDS-PAGE 测定蛋白质分子量第34-35页
     ·酯酶B1 对有机磷农药对硫磷(1605)的降解第35页
     ·降解酶的固定化第35页
     ·固定化酶的活力测定第35页
     ·酶的最佳固定化条件第35-36页
       ·最佳固定化酶浓度的确定第35-36页
       ·酶的最佳固定化时间第36页
     ·固定化酶的特性第36-37页
       ·固定化酶的最佳反应pH 值第36页
       ·固定化酶的最佳反应温度第36页
       ·固定化酶的热稳定性第36页
       ·常温下固定化酯酶 B1 的半衰期第36页
       ·重复使用对固定化酯酶活力的影响第36页
       ·酶促反应动力学第36-37页
       ·固定化酯酶 B1 对有机磷农药对硫磷(1605)的降解第37页
3 结果与分析第37-49页
   ·酶活力测定的标准曲线第37-38页
   ·酯酶B1 的分离纯化第38-40页
     ·硫酸铵分级沉淀第38页
     ·DEAE-Sepharose CL-6B 凝胶过滤第38-39页
     ·Sephadex G-150 分子筛层析第39-40页
     ·纯化结果第40页
   ·酶的性质第40-44页
     ·酶的纯度及分子量第40-41页
       ·酶的纯度鉴定第40-41页
       ·SDS-PAGE 测定酯酶B1 的分子量第41页
     ·酶作用最适温度第41-42页
     ·酶作用最适pH第42页
     ·酶促反应动力学第42-43页
     ·酶的酸碱稳定性第43页
     ·各种化学试剂对酶活力的影响第43-44页
     ·酯酶 B1 对农药对硫磷(1605)的降解第44页
   ·酯酶B1 的固定化第44-45页
     ·不同酶量固定化酶对α-乙酸萘酯的降解作用第44-45页
     ·固定化时间对α-乙酸萘酯降解率的影响第45页
   ·固定化酶的降解特性第45-49页
     ·固定化酶反应的最佳pH 值和温度第46页
     ·固定化酶的热稳定性第46-47页
     ·重复使用对固定化酶活力的影响第47页
     ·固定化酯酶B1 的半衰期第47-48页
     ·固定化酶促反应动力学第48-49页
     ·固定化酯酶 B1 对有机磷农药对硫磷(1605)的降解第49页
4 讨论第49-54页
   ·关于酯酶B1 的分离纯化第49-52页
   ·关于酯酶B1 的固定化第52-53页
   ·关于有机磷农药的降解第53-54页
   ·下一步研究设想第54页
5 结论第54-55页
参考文献第55-63页
致谢第63-65页
在读期间发表论文第65页

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